ICS 13.020.40 CCS Z 10 44 广 东 省 地 方 标 准 DB44/T 2340.1—2021 诸氏鲻虾虎鱼 毒理学评价 第 1 部分：急性毒性 Mugilogobius chulae—Toxicology evaluation—Part 1: Acute toxicity 2021 - 10 - 18 发布 2022 - 01 - 18 实施 广东省市场监督管理局 发 布 DB44/T 2340.1—2021 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 原理 ............................................................................... 2 5 方法 ............................................................................... 3 6 器材 ............................................................................... 3 7 评价步骤 ........................................................................... 4 8 质量控制 ........................................................................... 6 9 结果与报告 ......................................................................... 6 10 诸氏鲻虾虎鱼安乐死 ................................................................ 6 11 实验室废弃物处理 .................................................................. 6 附录 A（资料性） 诸氏鲻虾虎鱼繁育方法 ................................................. 7 附录 B（规范性） 诸氏鲻虾虎鱼驯养方法 ................................................. 8 附录 C（资料性） 96 h 诸氏鲻虾虎鱼急性毒性评价原始记录表 .............................. 9 I DB44/T 2340.1—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 DB44/T 2340《诸氏鲻虾虎鱼 毒理学评价》分为四个部分： ——第 1 部分：急性毒性； ——第 2 部分：摄食抑制； ——第 3 部分：生长抑制； ——第 4 部分：生殖毒性。 本文件是 DB44/T 2340 的第 1 部分。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省科学技术厅提出并组织实施。 本文件由广东省实验动物标准化技术委员会（GD/TC 93）归口。 本文件起草单位：广东省实验动物监测所。 本文件主要起草人：李建军、黄韧、朱才毅、余露军、赖素群、林忠婷、陈小曲、曾进、蔡磊。 II DB44/T 2340.1—2021 诸氏鲻虾虎鱼 毒理学评价 第 1 部分：急性毒性 1 范围 本文件规定了诸氏鲻虾虎鱼毒理学评价中急性毒性的原理、方法、器材、评价步骤、质量控制、数 据与报告、安乐死和实验室废弃物处理等要求。 本文件适用于直接或间接排入海洋、入海河口的污染物及受纳水体的急性毒性评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 17378.3 海洋监测规范 第3部分：样品采集、贮存与运输 GB 17378.5 海洋监测规范 第5部分：沉积物分析 GB/T 18420.2-2009 海洋石油勘探开发污染物生物毒性 第2部分：检验方法 GB 30980 海洋倾倒物质评价规范 疏浚物 GB/T 39649 实验动物 实验鱼质量控制 HJ 91.1 污水监测技术规范 HJ 493 水质 样品的保存和管理技术规定 NY 5052 无公害食品 海水养殖用水水质 SN/T 3592 实验室化学药品和样品废弃物处理的标准指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 实验鱼 3.1.1 实验诸氏鲻虾虎鱼 Laboratory Mugilogobius chulae 经人工繁育，对其携带的病原微生物及寄生虫进行控制，遗传背景明确或来源清楚，用于科学研 究、教学、生产、检定及其他科学实验的诸氏鲻虾虎鱼。 中文名：诸氏鲻虾虎鱼，学名：Mugilogobius chulae。 分类地位：鲈形目（Perciformes），虾虎鱼亚目（Gobioidei），虾虎鱼科（Gobiidae），鲻虾虎 鱼属（Mugilogobius）。 3.1.2 仔鱼 larva fish 从孵出开始至各鳍鳍条发育完整，鳞片开始出现为止。 3.1.3 日龄 days of age 1 DB44/T 2340.1—2021 自受精始，以日为单位表述的实验鱼年龄。 3.1.4 驯养 domestication 试验前对实验生物进行的环境适应性养殖。 受试物 3.2.1 污水 sewage 指在生产与生活活动中排放的水的总称。 [来源：GB 8978-1996，3.1] 3.2.2 海洋沉积物 marine sediments 各种沉积作用所形成的海底沉积物的总称。 [来源：GB/T 30740-2014，3.1] 3.2.3 疏浚物 dredged materials 为保障港口、码头、航道、锚地通行使用顺畅，满足港口设施及其他涉海工程建设需要从水下挖掘 出的沉积物。 [来源：GB 30980-2014，3.2] 毒理学评价 3.3.1 急性毒性 acute toxicity 机体接触外源物质后在短期内所产生的毒性效应。 3.3.2 静态毒性试验 static toxicity test 试验期间内不更换试验溶液，进行观察、测定生物异常或死亡效应的试验。 3.3.3 半静态毒性试验 semi-static toxicity test 以定期（如24 h）更换试验溶液的方式进行的试验。 3.3.4 流水毒性试验 flow-through toxicity test 以整个试验过程中试验溶液自动、持续地被更换的方式进行的试验。 3.3.5 半数致死浓度 half lethal concentration, LC50 在一定观察期内，造成50%的实验鱼死亡的毒物浓度。 [来源：GB/T 18420.2－2009，3.3] 4 原理 2 DB44/T 2340.1—2021 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水中溶解的污染物达到一定浓度或强度时，就会引起一系列 中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变，直至死亡。在规定的条件下，通过观察测定 诸氏鲻虾虎鱼在一定的试验时间内接触试验物质后的异常或死亡效应，得出污染物对诸氏鲻虾虎鱼有 明显影响的具体浓度。 5 方法 分为静态毒性试验、半静态毒性试验和流水毒性试验。 试验期间受试物实测浓度与配制浓度偏差超过20%，宜采用半静态毒性试验或流水毒性试验。 当受试物稳定性不明确时，仔鱼推荐采用静态毒性试验，成鱼采用半静态毒性试验或流水毒性试验。 6 器材 主要仪器设备 6.1.1 诸氏鲻虾虎鱼和饵料生物的养殖设备、水处理设备等。 6.1.2 测定环境因子的溶氧仪、盐度计、pH 计、温度计等。 6.1.3 电子天平、高速搅拌器、生物显微镜、游标卡尺、惰性材料容器、量筒、胶头滴管、手抄网等。 诸氏鲻虾虎鱼 6.2.1 质量 应符合GB/T 39649的规定。 繁育方法见附录A。 试验前应驯养合格。诸氏鲻虾虎鱼的驯养应符合附录B的规定。 6.2.2 规格 不同试验方法采用的诸氏鲻虾虎鱼规格应符合表1的规定。 表1 诸氏鲻虾虎鱼规格 日龄 体长 d mm 静态毒性试验 8～14 2.15 ± 0.35 静态毒性试验、半静态毒性试验或流水毒性试验 >120 试验方法 25 ± 5 6.2.3 饵料 6.2.3.1 仔鱼饵料 褶皱臂尾轮虫，质量应符合GB/T 39649中7.3.2的规定。 6.2.3.2 成鱼饵料 卤虫无节幼体，质量应符合GB/T 39649中7.3.2的规定。 3 DB44/T 2340.1—2021 受试物 污水采样应符合HJ 91.1的相关规定，样品贮存和运输规定应符合HJ 493的相关规定。 海洋水质样品采集、储存和运输应符合GB 17378.3的相关规定。 海洋沉积物样品采集、预处理和保存应符合GB 17378.5的相关规定。 疏浚物样品采集、运输和储存方法应符合GB 30980的相关规定。 样品标签应包含名称、编号、采样人、采样时间、数量、来源、采样条件等信息。如可能，应提供 受试物的水溶解度、主要毒性成分测定方法、保存条件、危险性、在水和光中的稳定性、蒸气压、快速 生物降解结果等信息。 参比物质 分析纯或以上等级的十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）。 麻醉剂 MS-222溶液，间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）与碳酸氢钠 (NaHCO3) 按1∶1质量比混合，溶 于水配制成一定浓度的溶液，密封避光保存于阴凉处，保存时间不超过一个月。 7 评