(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211157402.3 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 陈芊汝　朱昱兴　王立平　高鑫　 陈铁军　王莹　 (74)专利代理 机构 青岛鼎丞智佳知识产权代理 事务所(普通 合伙) 3727 7 专利代理师 吴春艳　韩耀朋 (51)Int.Cl. C12P 19/14(2006.01) C12N 9/24(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A61K 8/9711(2017.01)A61Q 19/02(2006.01) C12R 1/20(2006.01) (54)发明名称 一种低分子量 羊栖菜酶解产物 提取物、 其制 备方法及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种低分子量羊栖菜酶解产 物提取物、 其制备方法及其应用， 该低分子量羊 栖菜酶解产物 提取物的制备方法， 其包括以下步 骤： 利用生物酶和纤维素酶的组合物对羊栖菜进 行酶解反应， 并对酶解产物进行分离纯化， 得到 酶解产物提取物； 所述生物酶为保藏编号为 CGMCC No.14855的黄杆菌RC2 ‑3mut菌株发酵所 得的酶。 上述方法制备得到的低分子量羊栖菜酶 解产物提取物的酪氨酸酶抑制率高、 稳定性好， 可显著抑制黑色素的产生， 且安全无毒副作用， 可作为化妆品美白原料应用于美白护肤品和化 妆品领域。 权利要求书1页 说明书11页 附图9页 CN 115537437 A 2022.12.30 CN 115537437 A 1.一种低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 利用生物酶和纤维素酶的组合物对羊栖菜进行酶解反应， 并对酶解产物进行分离纯 化， 得到酶解产物提取物； 所述生物酶由保藏编号为CGMCC  No.14855的黄杆菌RC2 ‑3mut菌 株发酵所得的酶。 2.根据权利要求1所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备方法， 其特征在于， 该 方法具体包括以下步骤： 将所述生物酶和纤维素酶分别溶解在对应的缓冲溶 液； 再将生物酶溶液和纤维素酶溶液加入到羊栖菜溶液中充分混合， 进行酶解处理， 再将 处理后的羊栖菜混合液置 于沸水浴进行保温灭酶处 理； 对羊栖菜混合液进行离心并收集上清液， 对上清液进行分离纯化处理， 最终获得低分 子量羊栖菜酶解产物提取物。 3.根据权利要求1所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备方法， 其特征在于， 所 述生物酶的制备方法为： 将 黄杆菌RC2 ‑3mut菌株接种于液体培养基中， 在温度30 ‑35℃下摇 床培养得种子液； 再将种子液接种于发酵培养基中， 培养24 ‑72h， 对发酵液进行离心， 弃上 清液取沉淀， 再用Tris ‑HCl溶液溶解沉淀， 进行超声波破碎菌体， 离心取上清液， 冷冻干燥 得到生物酶。 4.根据权利要求2所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备方法， 其特征在于， 所 述羊栖菜溶 液的质量百分浓度为5％。 5.根据权利要求2所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备方法， 其特征在于， 酶 解条件为： 温度3 5～55℃， 转速120～180r/mi n， 摇床酶解1～3 h。 6.根据权利要求2所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制备方法， 其特征在于， 处 理每克羊栖菜所使用的所述 生物酶和纤维素酶的各自添加量均为20～10 0U。 7.一种低分子量羊栖菜酶解产物提取物， 其特征在于， 采用 如权利要求1～6中任一项 所述的制备 方法制备 得到。 8.如权利要求7所述的低分子量羊栖菜酶解产物提取物在制备化妆品和护肤品中的应 用。 9.根据权利要求8所述的应用， 所述化妆品和护肤品包括美白精华、 水、 面霜、 乳液、 面 膜、 防晒产品及隔离霜。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537437 A 2一种低分子量羊栖菜 酶解产物提取物、 其制备方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物制品技术领域， 尤其涉及 一种低分子量羊栖菜 酶解产物提取物及 其应用。 背景技术 [0002]羊栖菜是褐藻门马尾藻属的藻类植物之一， 已有多篇文献研究表明， 羊栖菜具有 多种生物活性， 如抗氧化、 抗病毒、 抗肿瘤、 抗衰老、 降 “三高”、 改善肠道屏障功能、 抗凝血等 功效。 但因羊栖菜存在分子量大、 生物可利用度低， 可渗透吸收性差、 黏度大等问题， 其应用 受到极大地限制。 而有研究表明， 低分子量段羊栖菜产品的水溶性及生物利用度高， 且具有 较高的生物活性， 对羊栖菜的降解处理可有效解决高分子量段羊栖菜应用中存在的上述问 题。 [0003]目前， 可获得低分子量羊栖菜的方式有多种， 降解方式主要为物理降解法、 化学降 解法和生物酶法。 但由于目前的物理、 化学降解方法都存在产 物不稳定、 难以进 行质控的瓶 颈问题， 在工业 生产中难以应用。 [0004]决定皮肤色调的主要因素是皮肤内 的黑色素， 肤色的深浅主要决定于细胞合成黑 色素的能力。 黑色素的生成主要受酪氨酸酶(TYR)、 酪氨酸酶相关蛋白 ‑1(TRP‑1)和酪氨酸 酶相关蛋白 ‑2(TRP‑2)的调控， 即 “三酶理论”。 酪氨酸酶是黑色素合 成的关键酶、 限速酶。 目 前， 市面上常用酪氨酸酶抑制剂来抑制黑色素的产生， 从而达到 皮肤美白的效果， 常见的酪 氨酸酶抑制剂有曲酸、 氢醌(对 苯二酚)、 熊果苷、 维生素C等， 这些酪氨 酸酶抑制剂都存在一 定的安全性问题， 而且稳定性差， 易受温度、 pH值、 光照等因素的影响而发生 失活。 因此开 发 安全有效、 较为稳定的酪氨酸酶抑制剂具有重要的应用价 值。 [0005]因此， 现有技 术有待进一步改进。 发明内容 [0006]针对上述问题， 本申请提供一种基于复合生物酶法的低分子量羊栖菜 酶解产物提 取物的制备方法， 对羊栖菜的降解效率高， 得到的低分子量羊栖菜酶解产物提取物的酪氨 酸酶抑制率高、 稳定性好， 可显著抑制黑色素的产生， 作为安全有效、 较为稳定的酪氨酸酶 抑制剂可应用于 美白护肤品和化妆品领域。 [0007]为解决上述问题， 申请人发现生物酶法具有反应条件温和、 反应效率高， 反应过程 容易控制， 产物稳定等优点， 是获得低分子量羊栖菜的理想方法。 通过大量实验发现， 利用 保藏编号为CGMCC  No.14855的黄杆菌RC2 ‑3mut菌株发酵所得的生物酶和纤维素酶 的组合 酶可高效降解羊栖菜， 得到具有高效抑制酪氨酸酶活性且稳定的低分子量羊栖菜酶解产 物， 用于开发美白产品。 [0008]本发明提供的技 术方案具体如下： [0009]第一方面， 本发明提供一种低分子量羊栖菜酶解产物提取物的制 备方法， 其包括 以下步骤：说　明　书 1/11 页 3 CN 115537437 A 3