(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211255565.5 (22)申请日 2022.10.13 (71)申请人 艾美卫信生物药业 （浙江） 有限公司 地址 315600 浙江省宁波市宁海县科技工 业园区竹泉路2 9号 (72)发明人 朱楠　马伟　 (74)专利代理 机构 北京维正专利代理有限公司 11508 专利代理师 石芳 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 19/04(2006.01) A61K 39/095(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/36(2006.01) (54)发明名称 一种脑膜炎球菌发酵培养方法、 发酵液、 荚 膜多糖、 应用 (57)摘要 本申请涉及生物工程的领域， 尤其是涉及一 种脑膜炎球菌发酵培养方法、 发酵液、 荚膜多糖、 应用。 发酵培养方法， 将脑膜炎球菌液体培养菌 液接种于脑膜炎球菌液体培养基中发酵培养， 根 据发酵液的OD600值， 判定发酵收获终点， 所述 OD600值是结合荚膜多糖收益曲线、 细菌内毒素曲 线以及有效荚膜多糖收益曲线得到。 本申请具有 的效果降低脑膜炎球菌的发酵的荚膜多糖内毒 素含量以及提高荚膜多糖产量的效果。 权利要求书1页 说明书12页 附图4页 CN 115466701 A 2022.12.13 CN 115466701 A 1.一种脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： 将脑膜炎球菌液体培养菌液接种于脑 膜炎球菌液体培 养基中发酵培 养， 根据发酵 液的OD600值， 判定发酵收获 终点。 2.根据权利要求1所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： OD600达到5.0以上时， 监测OD600值， OD600值至5.0‑6.0时， 收获脑 膜炎球菌发酵 液。 3.根据权利要求2所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： OD600达到5.0时， 监测 OD600值， OD600值至5.5‑6.0时， 收获脑 膜炎球菌A群、 C群和W13 5群发酵液。 4.根据权利要求3所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： OD600达到5.0时， 监测 OD600值， OD600值至5.5‑5.7时， 收获脑 膜炎球菌A群、 C群发酵 液。 5.根据权利要求3所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： OD600达到5.0时， 监测 OD600值， OD600值至5.8‑6.0时， 收获脑 膜炎球菌W13 5群发酵液。 6.根据权利要求2所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： OD600达到5.0以上时， 监测OD600值， OD600值至5.0‑5.5时， 收获脑 膜炎球菌 Y群发酵液。 7.根据权利要求1所述的脑膜炎球菌发酵培养方法， 其特征在于： 将脑膜炎球菌液体培 养菌液接种于脑膜炎球菌培养基中， 温度37 ±1.5℃， pH  6.8‑7.4， 转速100～300rpm进行发 酵培养。 8.采用权利要求1 ‑7任一项所述的发酵培 养方法制备的脑 膜炎球菌发酵 液。 9.由权利要求8所述的脑 膜炎球菌发酵发酵 液制备的精制多糖。 10.由权利要求9所述的脑膜炎球菌精制多糖所制备的脑膜炎球菌多糖疫苗或结合疫 苗。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115466701 A 2一种脑膜炎球菌发酵培养方 法、 发酵液、 荚膜多糖、 应用 技术领域 [0001]本申请涉及生物工程的领域， 尤其是涉及一种脑膜炎球菌 发酵培养方法、 发酵液、 荚膜多糖、 应用。 背景技术 [0002]脑膜炎球菌(meningococcus)的学名是脑膜炎奈瑟氏球菌(n.meninyitidis)， 为 流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌。 目前预防流行性脑脊髓膜炎最有效的方法是接种疫 苗， 通过发酵培 养脑膜炎球菌， 提取 出多糖制成多糖疫苗， 进 而达到预防脑 膜炎的效果。 [0003]例如专利申请号为2015105434251的专利文件公开了一种A群脑膜炎球菌的培养 方法， 将菌种在半综合培养基中培养扩增后再直接将种子培养于半综合培养基的发酵罐 中， 然而直接用半综合培养基的发酵罐进行发酵， 半综合培养基的成本较高且发酵后的脑 膜炎球菌较低， 因此不 适应于当前脑 膜炎球菌的培 养需求。 [0004]对于此， 现有专利申请号为2021103499492的专利文件公开了一种脑膜炎球菌培 养基及其配制方法及培养方法， 具体通过优化培养基配方， 在保证荚膜多糖产量和质量的 前提下降低使用酸水解酪蛋白， 从而节省生产成本 。 [0005]具体的， 脑 膜炎球菌的培 养方法包括以下步骤： S1、 培养基配制按设定配方配制脑 膜炎球菌 培养基； S2、 固体传代用菌种杆刮取A群脑膜炎球菌固体一代， 接种于 10％羊血琼脂培养基 平面上涂抹均匀， 把已接种 好的10％羊血琼脂培养基放入37℃， 7.5％CO2的培养箱内培养 12小时； S3、 摇瓶培养用移液管吸取S1中配制的培养基， 润洗10％羊血琼脂培养基上的菌 苔； 接种于S1中配制的培养基； 把已接种好的摇瓶放入大容量振荡器中， 在37℃， 200rpm 的 条件下培 养6小时， 至 菌种生长进入稳定期， 结束培 养。 [0006]针对上述中的相关技术， 发明人认为， 在发酵培养过程中， 脑膜炎球菌在不同生长 期处于同一培养条件， 且通常以菌株发酵进入稳定期作为发酵收获终点， 而此时菌株已生 长过量， 导致发酵过程中菌株死亡过多， 从而造成脑膜炎球菌生长代谢所产生的的细菌内 毒素含量较高。 [0007]而细菌性疫苗荚膜多糖类， 在后段工艺中往往较难去除细菌内毒素。 现有工艺将 细菌内毒素去除至质量标准之下， 往往需要增加复杂的一系列工艺。 这些工艺一方面增加 了有机试剂或其他外援物质， 其杂质去除率去除不彻底的话， 将会造成新的疫苗副反应； 另 一方面， 增加去除细菌内毒素 的工艺， 同时势必影响到荚膜多糖的收率降低。 因此， 如何避 免细菌内毒素的产生， 并将其控制下较低的质量标准之下， 使得疫苗成品易产生发热、 红 肿、 结节等 不良反应率进一 步降低， 是细菌性疫苗恒久的技 术课题。 发明内容 [0008]为了降低脑膜炎球菌的发酵的荚膜多糖内毒素含量， 本申请提供一种脑膜炎球菌说　明　书 1/12 页 3 CN 115466701 A 3