(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210024523.4 (22)申请日 2022.01.10 (71)申请人 山东第一医科 大学附属省立医院 （山东省立医院） 地址 250014 山东省济南市经十东路967 7 号省立医院东院 (72)发明人 白晓卉　刘静文　王榕榕　 (74)专利代理 机构 山东祺智知识产权代理有限 公司 373 61 代理人 王增娣 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于体外检测常染色体隐性遗传非综 合征性耳聋 基因MYO15A试剂盒 (57)摘要 本发明涉及医学领域， 具体涉及一种用于体 外检测常染色体隐性遗传非综合征性耳聋基因 MYO15A试剂盒。 针对现有技术的研究情况， 首先 本申请发明人发现了三个MYO15A的致病基因突 变位点， 分别为c.3952的G到A突变位点， c.6177+ 1的G到T突变位点， c.42 52的G到A突变点。 本发明 针对这三个突变位点， 提供的用于体外检测常染 色体隐性遗传非综合征性耳聋基因MYO15A试剂 盒， 该试剂盒主要包括特异性引物、 PCR混合液、 酶切混合液、 限制性内切酶、 阳性对照标本及阴 性对照标本， 可以同时鉴定 上述三个MYO15A的致 病基因突变。 其鉴定过程中， 各试剂及基因序列 间不会互相影响， 鉴定过程简单高效， 结果安全 可靠。 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 附图1页 CN 114317721 A 2022.04.12 CN 114317721 A 1.一种用于体外检测常染色体隐性遗传非综合征性耳聋基因MYO15A试剂盒， 包括特异 性引物、 PCR混合液、 酶切混合液、 限制性内切酶、 阳性对照标本及阴性对照标本， 其特征在 于： 所述的特异性引物包括 三对， 分别为： 引物1‑F： 5’ ‑CCTTGGAAGATTGCCTGGTA‑3’， 如SEQ ID NO： 1所示； 引物1‑R： 5’ ‑GACAGGCAGGAACTCTCAC C‑3’， 如SEQ ID NO： 2所示； 引物2‑F： 5’ ‑CATTCCCTCCTCTTTCCACA‑3’， 如SEQ ID NO： 3所示； 引物2‑R： 5’ ‑GGCTCCACCAGTTGTTCAAT‑3’， 如SEQ ID NO： 4所示； 引物3‑F： 5’ ‑AAATCCCACCAGAACCCTCT‑3’， 如SEQ ID NO： 5所示； 引物3‑R： 5’ ‑AAACTCACCCTCCCCAAATC‑3’， 如SEQ ID NO： 6所示； 限制性内切酶为BsrBI、 MseI、 HpaI I； 阳性对照标本1为如SEQ  ID NO： 8所示的DNA片段； 对应的阴性对照标本1是如SEQ  ID  NO： 7所示的DNA片段； 阳性对照标本2是如SEQ  ID NO： 10所示 的DNA片段； 对应的阴性对照标本2是如SEQ  ID  NO： 9所示的DNA片段； 阳性对照标本3是如SEQ  ID NO： 12所示 的DNA片段； 对应的阴性对照标本3是如SEQ  ID  NO： 11所示的DNA片段。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的PCR混合液包括10 ×PCR buffer、 Taq酶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317721 A 2一种用于体外检测常染色体隐性遗传非综合征性耳聋基因 MYO15A试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及医学领域， 具体涉及一种用于体外检测常染色体隐性遗传非综合征性 耳聋基因MYO15A试剂盒。 背景技术 [0002]俗称的耳聋， 又称为听觉障碍， 是指听觉系统中的传音、 感音以及对声音的综合分 析的各级神经中枢发生器质性或功能性异常， 而导致听力出现不同程度的减退。 目前 的研 究表明， 有很多影响听力损失的因素， 包括年龄、 噪声、 耳毒性药物及基因等。 耳聋分为遗传 性耳聋和非遗传性耳聋， 其中半数以上为遗传性耳聋。 非综合征性耳聋约占遗传性耳聋的 70％， 常染色体隐性遗传非综合征性耳聋在非综合征性耳聋中约占75％～85％， 临床多表 现为双耳学语前非进 行性重度－极重度感音神经性聋。 目前 临床已发现77个基因与常染色 体隐性遗传非综合征性耳聋相关， 但 其致病机制仍需进一步研究， 同时， 还有 大量与遗传性 耳聋相关的基因未被发现。 MYO15A突变最初被发现是源于1995年Fr iedman等发现的印度尼 西亚巴厘岛一个神秘的采用独特手语进行交流的村落——Beng ‑kala村， 这个村落中2185 名村民中有47名(2.2％)患有极重度耳聋， 这些耳聋患者符合常染色体隐性遗传非综合征 性耳聋特点， 在染色体17p11.2上发现的链接间隔， 命名为DFNB3基因座位， 这是继DFNB1 (GJB2及GJB6基因突变)及DFNB2(MYO7A基因突变)之后报道的第三个常染色体隐性遗传 非 综合征型耳聋基因座位。 MY O15A基因包括66个外显子， 编码三个独特的亚型， 其中之一是肌 球蛋白15， 它对传递知觉的毛细胞静纤毛的发育和维持有重要作用。 目前625个MY O15A的隐 性突变与听力损失相关， 其中的225个 分为致病突变， 60个为疑似致病突变， 340个为不明意 义的突变， MYO15A基因突变临床表现为学语前非进行性重度－极重度全频听力损失， 无前 庭症状； shaker ‑2小鼠静纤毛变短， 肌动蛋白轴破坏。 [0003]MYO15A基因是常见的耳聋基因之一， 据统计到 目前为止已鉴定出225个致病突变 点。 到目前为止， 针对现有已知位点， 检测突变位点的方法有直接测序法、 荧光定量PCR法、 基因芯片法等， 其中直接测序法是鉴定突变的黄金标准， 但因该操作费用昂贵、 步骤复杂而 导致其未能广泛应用。 发明内容 [0004]针对现有技术的研究情况， 首先本申请发明人发现了三个MYO15A的致病基因突变 位点， 分别为c.3952的G到A突变位点， c.6177+1的G到T突变位点， c.4252的G到A突变点。 本 发明针对这三个突变位点， 提供了一种用于体外检测常染色体隐性遗传非综合征性耳聋基 因MYO15A试剂盒。 该试剂盒主要包括特异性引物、 PCR混合液、 酶切混合液、 限制性内切酶、 阳性对照标本及阴性对照标本， 可以同时鉴定上述三个MYO15A的致病基因突变。 其鉴定过 程中， 各试剂及基因序列间不会互相影响， 鉴定过程简单高效， 结果安全可靠， 为大范围地 进行耳聋相关基因突变的大规模筛查和预防性检查提供基础， 且检测成本低， 操作简单， 准说　明　书 1/7 页 3 CN 114317721 A 3