(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221010173 6.2 (22)申请日 2022.01.27 (71)申请人 宁夏医科大学总医院 地址 750003 宁夏回族自治区银川市 兴庆 区胜利南 街804号 申请人 苏州淦江生物技 术有限公司 (72)发明人 于辛酉　潘丽华　郭翠　杨尧　 戴国华　史向荣　魏波　马威　 王晓燕　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的 检测试剂盒及其检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测苯丙氨酸羟化 酶基因突变的检测试剂盒及其检测方法。 本发明 具体地公开了用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突 变的组合物、 试剂盒、 检测方法。 本发明通过在同 一个PCR反应体系中同时扩增靶基因和内参基 因， 计算靶基因和内参基因的Ct值差， 综合野生 型反应体系的 △Ct值和突变型反应体系的 △Ct 值， 判断基因是否发生突变。 本发明选用的内参 基因和检测基因位于同一条染色体上， 同时使用 了UNG酶/dUTP抗污染体系， 降低假阳性结果的产 生， 具有准确性高， 抗污染能力强， 检测速度快， 对仪器性能要求低的优点。 本发明所述组合物、 试剂盒及检测方法可以在体外准确地检出患者 血液样本中苯丙氨酸羟化酶基因的突变 。 权利要求书2页 说明书39页 序列表3页 附图8页 CN 114457151 A 2022.05.10 CN 114457151 A 1.用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的组合物， 其特征在于， 所述组合物包括： 611A上 游引物、 611G上游引物、 611下游引物、 728G上游引物、 728A上游引物、 728下游引物、 1068C上 游引物、 10 68A上游引物、 10 68下游引物、 61 1探针、 728探针和10 68探针， 其中： 所述611A上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.1的单链DNA； 所述611G上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.2的单链DNA； 所述611下游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.3的单链DNA； 所述728G上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.4的单链DNA； 所述728A上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.5的单链DNA； 所述728下游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.6的单链DNA； 所述1068C上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.7的单链DNA； 所述1068A上游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.8的单链DNA； 所述1068下游引物是核苷酸序列是SEQ  ID No.9的单链DNA； 所述611探针是核苷酸序列是SEQ  ID No.10的单链DNA； 所述728探针是核苷酸序列是SEQ  ID No.11的单链DNA； 所述1068探针是核苷酸序列是SEQ  ID No.12的单链DNA。 2.根据权利要求1所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物还包括用于检测内参基因的 上游引物、 用于检测内参基因的下游引物和用于检测内参基因的探针， 所述内参基因为人 VPS29基因。 3.根据权利要求2所述的组合物， 其特征在于， 所述用于检测内参基因的上游引物是核 苷酸序列是SEQ  ID No.13的单链DNA； 所述用于检测内参基因的下游引物是核苷酸序列是 SEQ ID No.14的单链DNA； 所述用于检测内参基因的探针是核苷酸序列是SEQ  ID No.15的 单链DNA。 4.根据权利要求1 ‑3中任一所述的组合物， 其特征在于， 所述611探针、 所述728探针、 所 述1068探针和所述用于检测内参基因的探针的5 ’端标记荧 光基团， 3 ’端标记淬灭基团。 5.用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的试剂， 其特征在于， 所述试剂包含权利要求1 ‑4 中任一所述的组合物。 6.根据权利要求5所述的试剂， 其特征在于， 所述试剂还包含尿嘧啶 ‑N‑糖基化酶和 dUTP。 7.根据权利要求6所述的试剂， 其特征在于， 所述试剂还包含Taq  DNA聚合酶、 dNTP、 PCR 缓冲液、 Mg2+中的一种或多种。 8.根据权利要求7所述的试剂， 其特征在于， 所述试剂还包含野生型对照品和突变型对 照品， 其中野生型对照品为包含611位点的野生型DNA、 包含728位点的野生型DNA和包含 1068位点的野生型DNA； 突变型对照品为包含611位点的突变型DNA、 包含728位点的突变型 DNA和包含1068位点的突变型DNA。 9.权利要求1 ‑4中任一所述的组合物或权利要求5 ‑8中任一所述的试剂在制备检测苯 丙氨酸羟化酶基因突变的产品中的应用。 10.一种检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： A1)提取待测样品DNA； A2)以所述DNA为模板， 利用权利 要求1‑4中任一所述的组合物或权利要求5 ‑8中任一所权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114457151 A 2述的试剂进行PCR检测； A3)根据检测结果判定丙氨酸羟化酶基因是否发生 突变。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114457151 A 3