(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210220526.5 (22)申请日 2022.03.08 (71)申请人 河南中检食安 生物科技有限公司 地址 450000 河南省郑州市经济技 术开发 区航海东路与二十五大街交叉口西北 角联东U谷产业园25号楼4楼 (72)发明人 许世伟　王群智　许远　邵俊影　 吴镇宇　王欣　林圣博　 (74)专利代理 机构 成都顶峰专利事务所(普通 合伙) 51224 专利代理师 钱学宇 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/14(2006.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 金黄色葡萄球菌的LAMP双链检测探针、 试剂 盒及检测方法 (57)摘要 本发明提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP双 链检测探针、 试剂盒及检测方法， 属于生物技术 领域。 该双链检测探针包括发光探针和淬灭探 针； 发光探针包括依次连接的保守序列和环引物 LF， 保守序列的5 ’端标记有荧光发光基团； 淬灭 探针与发光探针的保守序列互补， 淬灭探针的3 ’ 端标记有荧光淬灭基团。 LAMP检测试剂盒包括这 种双链检测探针， 该试剂盒及检测方法， 以金黄 色葡萄球菌isdD基因为检测靶标， 采用双链探 针‑恒温变色体系， 可兼具荧光定量PCR图谱分析 及肉眼观察法来判读结果， 探针特异性强， 变色 颜色对比明显， 不易产生误判， 双重体系互相映 照， 检测的准确性高。 权利要求书2页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114540516 A 2022.05.27 CN 114540516 A 1.一种金黄色葡萄球菌的LAMP双链检测探针， 其特征在于， 所述双链检测探针包括发 光探针和淬灭探针； 所述发光探针包括依次连接的保守序列和环引物LF， 所述保守序列的5 ’端标记有荧光 发光基团， 所述发光探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述淬灭探针与所述发光探针的保守序列互补， 所述淬灭探针的3 ’端标记有荧光淬灭 基团， 所述淬灭探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌的LAMP双链检测探针， 其特征在于， 所述荧光 发光基团包括FAM、 VIC、 TET； 所述荧光淬灭基团包括TAMRA、 QSY、 BHQ。 3.一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 其包括如权利要求1或2所述 的LAMP双链检测探针。 4.根据权利要求3所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒 还包括检测引物组， 所述检测引物组针对金黄色葡萄球菌的isdD基因编码序列设计， 所述 检测引物组包括外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP； 所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述外引物B3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述内引物FIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述内引物BIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示。 5.根据权利要求3所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述双链检 测探针中所述发光探针和淬灭探针的浓度比为1:1.2 ～1.8。 6.根据权利要求4所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述外引物 F3和外引物B3的浓度均为0.15～0.25 μM， 所述内引物FIP和所述内引物BIP的浓度均为1.5 ～1.7 μM。 7.根据权利要求3～6任一项所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括以下一种或多种组分： DNA聚合酶、 dNTPs、 显色剂、 甜菜碱、 pH调节剂、 ddH2O、 阳性对照品、 阴性对照品； 优选地， 所述显色剂为 酚红、 甲酚或中性红。 8.一种金黄色葡萄球菌的LAMP检测方法， 其特征在于， 其包括： 利用外引物F3、 外引物 B3、 内引物FIP、 内引物BIP以及发光探针和淬灭探针在LAMP反应 体系下， 扩增目的基因； 所述发光探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述淬灭探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述外引物B3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述内引物FIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述内引物BIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示。 9.根据权利 要求8所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测方法， 其特征在于， 在所述LAMP反 应体系配制之前， 还包括将所述发光探针和淬灭探针混合， 于92～97℃下加热4～6min后， 置于冰上骤冷。 10.根据权利要求8所述的金黄色葡萄球菌的LAMP检测方法， 其特征在于， 所述LAMP反权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114540516 A 2应的反应温度为6 0～65℃下， 反应时间为5 0～70min。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114540516 A 3