(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210241081.9 (22)申请日 2022.03.11 (71)申请人 王伟伟 地址 519060 广东省珠海市香洲区南屏镇 南屏高科技工业区屏北一路5号 (72)发明人 王伟伟　周顺　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种前列腺癌miRNA检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一 种前列腺癌miRNA检测试剂盒及其应用。 本发明 公开了联合检测miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA‑619的表达 水平在制备诊断前列腺癌的产 品中的应用以及相关的检测试剂盒。 另外， 本发 明还提供了miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA ‑619 在制备治疗前列腺癌的药物组合物的应用以及 相关的药物组合物。 本发明的试剂盒能够作为前 列腺癌诊断的手段之一， 具有检测快速方便、 检 测灵敏度高、 特异度好。 本发明的药物组合物对 前列腺癌有较好的抑制作用， 在前列腺癌治疗中 具有重要的参 考意义和现实意 义。 权利要求书1页 说明书6页 CN 114457162 A 2022.05.10 CN 114457162 A 1.一种诊断前列腺癌的miRNA标志物， 其特征在于， 所述标志物为miRNA ‑4786、 miRNA ‑ 2053、 miRNA‑619的组合物。 2.一种前列腺癌的检测试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括检测miRNA ‑4786、 miRNA ‑ 2053、 miRNA‑619表达水平的试剂。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂包括特异性扩增miRNA ‑ 4786、 miRNA ‑2053、 miRNA‑619的引物。 4.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的特异性扩增miRNA ‑4786、 miRNA ‑ 2053、 miRNA‑619的引物包括反转录引物和检测引物。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA ‑ 619的反转录引物分别为： miRNA‑4786反转录引物： 5 ’ ‑ctcaactggtgtcgtg gagtcggcaattcagttgaggcccagac‑3’； miRNA‑2053反转录引物： 5 ’ ‑ctcaactggtgtcgtg gagtcggcaattcagttgaggtaaatag‑3’； miRNA‑619反转录引物： 5 ’ ‑ctcaactggtgtcgtg gagtcggcaattcagttgagggctcatg‑3’。 6.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA ‑ 619检测引物分别为： miRNA‑4786‑F： 5’ ‑gccgagtgaagccagctctg‑3’； miRNA‑4786‑R： 5’ ‑ctcaactggtgtcgtg gagggcatggcc‑3’； miRNA‑2053‑F： 5’ ‑tcggcagggtgttaattaaacct‑3’； miRNA‑2053‑R： 5’ ‑ctcaactggtgtcgtg gacttgccatg‑3’； miRNA‑619‑F： 5’ ‑gccgaggctgggattacagg‑3’； miRNA‑619‑R： 5’ ‑ctcaactggtgtcgtg gacgcccacctc‑3’。 7.一种如权利要求1所述的miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA ‑619基因的用途， 其特征在 于， 用于制备治疗前列腺癌的药物组合物。 8.根据权利要求7所述的用途， 其特征在于， 所述的药物组合物包括miRNA ‑4786、 miRNA‑2053、 miRNA‑619基因的抑制剂。 9.根据权利要求8所述的药物组合物， 其特征在于， 所述miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA‑619基因的抑制剂为 siRNA， 所述的miRNA ‑4786、 miRNA ‑2053、 miRNA ‑619基因的siRNA 序列分别为： si‑miRNA‑4786： 5’ ‑atacttcggtcgagaccagacccggc‑3’； si‑miRNA‑2053： 5’ ‑aacacaattaatttggagataaatggg‑3’； si‑miRNA‑619： 5’ ‑tgcgaccctaatgtccgtactcg gat‑3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457162 A 2一种前列腺癌miRNA检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域技术领域。 更具体地属于分子生物学技术领域， 涉及一 种前列腺癌miRNA检测试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤。 2004年WHO 《泌尿系统及男性生殖 器官肿瘤病理学和遗传学》 中前列腺癌病理类型上包括腺癌(腺泡腺癌)、 导管腺癌、 尿路上 皮癌、 鳞状细胞癌、 腺鳞癌。 其中前列腺腺癌占95％以上， 因此， 通常我们所说的前列腺癌就 是指前列腺腺癌。 2012 年我国肿瘤登记 地区前列腺癌发病率为9.92/10万， 列男性恶性肿瘤 发病率的第6位。 发病年龄在55岁前处于较低水平， 55岁后逐渐升高， 发病 率随着年龄的增 长而增长， 高峰年龄是70～8 0岁。 家族遗传型前列腺癌患者 发病年龄稍早， 年龄≤55岁的患 者占43％。 [0003]目前， 临床诊 断前列腺癌主要依靠直肠指诊、 血清PSA、 经直肠前列腺超声和盆腔 MRI检查， CT对诊断早期前列腺癌的敏感性低于MRI。 因前列腺癌骨转移 率较高， 在决定治疗 方案前通常还要进行核素骨扫描检查。 确诊 前列腺癌需要通过前列腺穿刺活检进 行病理检 查。 前列腺癌的恶性程度可通过组织学分级进行评估， 最常用的是Gleason评分系统， 依据 前列腺癌组织中主要 结构区和次要结构区的评 分之和将前列腺癌的恶性程度划分为2～10 分， 分化最好的是1+1＝2分， 最差的是5+5＝10分。 但是， 这些检测存在较大的局限性(CN   110317870  B)， 其中， (1)直肠指检的局限性是： 直肠指检漏诊率很高， 且查出时大部分已属 中晚期， 不易临床治疗； (2)血清前列腺特异性抗原(PSA)直肠指检的局限性是： 检测PSA检 测特异性差， 前列腺炎症、 前列腺肥大等均可能导致PSA增高， 并且PSA增高同样大部 分发生 在癌症的中晚期， 不易临床治疗。 (3)直肠超声波检测的局限性是： 超声波检测对一些良性 肿块误诊率较高， 不能显示肿瘤内部结构及周围组织导致诊断符合率低； (4)组织活检的局 限性是： 组织活检是目前前列腺癌诊断的金标准， 但由于其创伤性和复杂性， 因此无法频繁 使用。 [0004]进入21世纪后， 随着现代生物技术突风猛进的发展， 尤其是基因测序技术和基因 组分析技术的成熟， 科学家们发现大部分基因被转录为非编码RNA(non ‑coding RNA， ncRNAs)。 非编码RNA根据RNA编码长度的不同分为两种， 一种为长度小于200个核苷酸的 RNA， 主要有微小RNA(miRNAs)， 小干扰RNA(siRNAs)等， 其中， miRNAs是一种 小的(约22个核 苷酸)非编码RNA， 在细胞增殖、 分化、 凋亡和癌变等多种生物学和病理过程中起着重要作 用； miRNAs参与了肿瘤发展的各个阶段， 表明mi RNA的异常表达在肿瘤发展 过程中对已知癌 基因或抑癌基因的表达起着重要的调节作用。 发明内容 [0005]本发明要解决的技术问题一是筛选合适可用于前列腺癌诊断或治疗的miRNA标志 物； 二是在此基础上， 开发一种用于检测前列腺癌的试剂盒。说　明　书 1/6 页 3 CN 114457162 A 3