(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210269384.1 (22)申请日 2022.03.18 (71)申请人 柳州市工人医院 地址 545027 广西壮 族自治区柳州市和平 路156号 (72)发明人 凌宙贵　胡灼君　韦晓谋　唐贞明　 温中薇　汤滢　 其他发明人请求 不公开姓名　 (74)专利代理 机构 广西中知国华知识产权代理 有限公司 45131 专利代理师 韦玲双 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种肺结核 线粒体衍 生小RNA检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种肺结核线 粒体衍生小RNA 检测试剂盒， 其特征在于： 包括： 1对线粒体衍生 小RNA表达比值上调和6对线粒体衍生小RNA表 达 比值下调相应逆转录引物、 检测引物。 本发明提 供肺结核患者周外血中线粒体衍生小RNA (mdsRNA)比值的特异表达谱， 及其逆 转录引物和 检测引物、 检测试剂盒， 以及 诊断模型， 为临床上 肺结核的早期发现和早期治 疗提供支持。 权利要求书3页 说明书7页 序列表3页 附图1页 CN 114540518 A 2022.05.27 CN 114540518 A 1.一种肺结核线粒体衍生小RNA检测试剂盒， 其特征在于： 包括1对线粒体衍生小RNA表 达比值上调的mds00013048_to_mds00017015和6对线粒体衍生小RNA表达比值下调的 mds00010700_to_mds00015863， mds00010700_to_mds00022420， mds00012442_to_ mds00021234， mds00017015_to_mds00021234， mds00017015_to_mds00022420， mds00024854_to_mds0 002807相应逆转录引物、 检测引物。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于： 所述线粒体衍生小RNA来自血浆中外周 血单个核细胞。 3.根据权利要求1所述的试剂盒中特异表达的7对线粒体衍生小RNA比值的逆转录引物 和检测引物， 其特征在于： 将7对线粒体衍生小RNA表达比值分别拆分为9个线粒体衍生小 RNA的逆转录引物和检测引物， 具体如下： (1)mds00010700的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 1所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 2所示： SEQ ID NO： 1： 5’ ‑TGGTCAGAGA AAAAGT‑3’； SEQ ID NO： 2： 5’ ‑CGTATTCGACGACT TTTT‑3’； (2)mds00017015的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 3所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 4所示： SEQ ID NO： 3： 5’ ‑TGGTCAGAGA AAAAG‑3’； SEQ ID NO： 4： 5’ ‑CAGCGACGATCGCT TTTTC‑3’； (3)mds00024854的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 5所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 6所示： SEQ ID NO： 5： 5’ ‑TAATGCTAAGTTAGCTTTACAGTG‑3’； SEQ ID NO： 6： 5’ ‑ATCCGTATTCGCACTGTA AA‑3’； (4)mds00013048的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 7所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 8所示： SEQ ID NO： 7： 5’ ‑CCTATCACAC CCCATCCTA‑3’； SEQ ID NO： 8： 5’ ‑ATCCGTATTCTAGGATGGGG‑3’； (5)mds00012442的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 9所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 10所示： SEQ ID NO： 9： 5’ ‑TACAGTCCAATGCTTCACTCAGC CATTTTACC‑3’； SEQ ID NO： 10： 5’ ‑GGTAAAATGGCTGAGTG ‑3’； (6)mds00015863的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 11所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 12所示： SEQ ID NO： 11： 5’ ‑TGTGAGCCCGTCTAAAC‑3’； SEQ ID NO： 12： 5’ ‑GTATTCGACGGTTTAGA‑3’； (7)mds00022420的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 13所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 14所示： SEQ ID NO： 13： 5’ ‑TGGTGTCCTTGGAAA‑3’； SEQ ID NO： 14： 5’ ‑TCCGTATTCGGTTTAGAC‑3’； (8)mds00028073的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 15所权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114540518 A 2示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 16所示： SEQ ID NO： 15： 5’ ‑TAGCAGTTCTTGTGAGCT TTCTC‑3’； SEQ ID NO： 16： 5’ ‑TCCGTATTGAGAAAGCTCACA ‑3’； (9)mds00021234的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 17所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 18所示： SEQ ID NO： 17： 5’ ‑GGTGTCCTTGGAAAA‑3’； SEQ ID NO： 18： 5’ ‑CCGTATTCTAGTTTTCCA‑3’。 4.一种用于肺结核诊断用的试剂 盒或生物芯片， 其特征在于： 包括特异表达的7对线粒 体衍生小RNA比值的逆转录引物和检测引物， 将7对线粒体衍生小RNA表达比值分别拆 分为9 个线粒体衍 生小RNA的逆转录引物和检测引物， 具体如下： (1)mds00010700的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 1所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 2所示： SEQ ID NO： 1： 5’ ‑TGGTCAGAGA AAAAGT‑3’； SEQ ID NO： 2： 5’ ‑CGTATTCGACGACT TTTT‑3’； (2)mds00017015的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 3所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 4所示： SEQ ID NO： 3： 5’ ‑TGGTCAGAGA AAAAG‑3’； SEQ ID NO： 4： 5’ ‑CAGCGACGATCGCT TTTTC‑3’； (3)mds00024854的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 5所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 6所示： SEQ ID NO： 5： 5’ ‑TAATGCTAAGTTAGCTTTACAGTG‑3’； SEQ ID NO： 6： 5’ ‑ATCCGTATTCGCACTGTA AA‑3’； (4)mds00013048的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 7所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 8所示： SEQ ID NO： 7： 5’ ‑CCTATCACAC CCCATCCTA‑3’； SEQ ID NO： 8： 5’ ‑ATCCGTATTCTAGGATGGGG‑3’； (5)mds00012442的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 9所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 10所示： SEQ ID NO： 9： 5’ ‑TACAGTCCAATGCTTCACTCAGC CATTTTACC‑3’； SEQ ID NO： 10： 5’ ‑GGTAAAATGGCTGAGTG ‑3’； (6)mds00015863的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 11所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 12所示： SEQ ID NO： 11： 5’ ‑TGTGAGCCCGTCTAAAC‑3’； SEQ ID NO： 12： 5’ ‑GTATTCGACGGTTTAGA‑3’； (7)mds00022420的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 13所 示， 前向检测引物的序列如SEQ  ID NO： 14所示： SEQ ID NO： 13： 5’ ‑TGGTGTCCTTGGAAA‑3’； SEQ ID NO： 14： 5’ ‑TCCGTATTCGGTTTAGAC‑3’； (8)mds00028073的逆转录引物和前向检测引物： 逆转录引物的序列如SEQ  ID NO： 15所权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114540