(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210333706.4 (22)申请日 2022.03.30 (71)申请人 东南大学 地址 210096 江苏省南京市玄武区新 街口 街道四牌楼 2号 (72)发明人 吴国球　范小波　肖枫　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 张恩慧 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/682(2018.01) G01N 33/52(2006.01) C12R 1/36(2006.01)C12R 1/35(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA 探针及其应用 (57)摘要 本发明公开一种检测泌尿生殖道感染病原 体核酸的DNA探针及其应用,泌尿生殖道感染病 原体包括沙眼衣原体、 淋病奈瑟菌和生殖支原 体， DNA探针包括探针H1和探针H2， DNA探针与目 标序列混合进行催化发夹自组装反应， 探针H1的 5’端由地高辛修饰， 探针H2的5 ’端由生物素修 饰。 本发明利用DNA探针与目标序列混合催化发 夹自组装反应结合免疫层析试纸条， 在等温无酶 扩增环境下即可快速、 高灵敏度、 高特异性地检 测沙眼衣原体、 淋病奈瑟菌和生殖支 原体。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 114790491 A 2022.07.26 CN 114790491 A 1.一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针， 其特征在于， 所述泌尿生殖道感染 病原体包括沙眼衣原体、 淋病奈瑟菌和生殖支原体， 所述DNA探针包括探针H1和探针H2， DNA 探针与目标序列混合进行催化发夹自组装反应， 探针H1的5 ’端由地高辛修饰， 探针H2的5 ’ 端由生物素修饰。 2.根据权利要求1所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针， 其特征在于， 所 述泌尿生殖道感染病原体为沙眼衣原体， 所述DNA探针以S EQ ID NO.1所示的基因作为检测 靶标， 所述探针H1为序列如SEQ  ID NO.2所示的CT ‑H1， 所述探针H2为序列如SEQ  ID NO.3所 示的CT‑H2。 3.根据权利要求1所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针， 其特征在于， 所 述泌尿生殖道感染病原体为淋病奈瑟菌， 所述DNA探针以S EQ ID NO.4所示的基因作为检测 靶标， 所述探针H1为序列如SEQ  ID NO.5所示的NG ‑H1， 所述探针H2为序列如SEQ  ID NO.6所 示的NG‑H2。 4.根据权利要求1所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针， 其特征在于， 所 述泌尿生殖道感染病原体为生殖支原体， 所述DNA探针以S EQ ID NO.7所示的基因作为检测 靶标， 所述探针H1为序列如SEQ  ID NO.8所示的MG ‑H1， 所述探针H2为序列如SEQ  ID NO.9所 示的MG‑H2。 5.根据权利要求2所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测沙 眼 衣原体产品中的应用。 6.根据权利要求3所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测淋病 奈瑟菌产品中的应用。 7.根据权利要求4所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测生殖 支原体产品中的应用。 8.一种泌尿生殖道感染病原体核酸的检测方法， 其特 征在于， 包括以下检测步骤： (1)取阴道分泌物， 并将拭子 头浸入含细胞保存液的取样管中； (2)取250 μL上述的待测标本， 加入到含有H1和H2冻干粉的试管中， 充分混匀后， 至于35 ℃水浴锅中， 水浴 反应15分钟； (3)水浴后， 取80μL上述反应液分别滴加在免疫分析试纸条的加样孔中， 5 ‑10分钟后， 将分析试纸条插 入荧光检测仪， 读取检测线和质控线的荧 光值。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114790491 A 2一种检测泌 尿生殖道感 染病原体核酸 的DNA探针及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及核酸检测技术领域， 具体的是一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的 DNA探针及其应用。 背景技术 [0002]沙眼衣原体(Chlamydia  Trachomatis， CT)感染是 目前诊断发病数最高的一种 性 传播疾病， 据统计， 该疾病全球每年约有1.3亿新 发病例， 其中青少年是 受影响较大的群体。 女性感染后会 出现盆腔炎、 尿道炎、 宫外孕、 输卵管阻塞、 异 位妊娠等症状， 还会增加宫颈癌 的发病风险。 对于男性， 则会出现尿道炎、 附睾炎、 结膜炎等症状。 此外， 沙眼衣原体感染还 会引发反应性关节炎以及新 生儿眼炎和肺炎 。 [0003]目前临床上检测沙眼衣原体的方法主要有培养法、 免疫法和聚合酶链式反应 (polymerase  chain reaction， PCR)法。 培养法检测沙眼衣原 体是传统的病原学检测方法， 但由于检测耗时， 并且易受标本取材多少， 送检时间等因素影响导致假阴性。 免疫法操作简 单， 耗时较短， 但是特异性和敏感性却不够理想。 PCR法灵敏度高， 特异性强， 但是需要专门 的技术人员， 对仪器也有特定的要求， 在基层单位和偏远地区不能普及开 来。 [0004]淋病奈瑟菌(Neisseria  gonorrhoeae， NG)是淋病的病原菌， 淋病不及时诊断和治 疗会引起严重的并发症， 早期诊断和治疗是控制淋病传播的关键。 实验室诊断技术在淋病 的诊断和治疗中具有十分重要的作用。 目前， 常用的实验室诊断方法有涂片镜检、 分离培 养、 免疫学方法、 分子生物学检查和快速检查等。 分泌物直接涂片染色镜检大多常用革兰染 色， 但是有其局限性， 细菌培养是诊断淋病的金标准， 也是目前诊断淋病最可靠的方法， 但 淋病奈瑟菌 培养困难， 仅做细菌学培 养检查， 诊断意 义有限。 [0005]生殖支原体(Mycoplasma  genitalium， MG)是一种性传播感染病原体， 可引起宫颈 炎、 盆腔炎、 前列腺炎、 附翠炎、 直肠炎、 尿道炎、 关节炎、 输卵管不孕等症状或并发症。 据文 献汇报， 在男性有症状非淋菌性尿道炎患者中， 生殖支原体阳性率为 15％～25％， 我国南 京 性病门诊有尿道炎症状男性患者中生殖支原体阳性率 19.7％， 在非衣原体性 非淋球菌性尿 道炎中生殖支 原体阳性 率达41.4％。 [0006]生殖支原体的临床表现缺乏特异性， 其诊断依赖于实验室的病原学诊断。 生殖支 原体缺乏细胞壁， 革兰染色镜检不可见。 并且体外培养 极其困难且耗时长达数月， 使得分离 培养不能在临床上常规开展。 生殖支原体的基因组与肺炎支原体十分相似， 由于有交叉反 应性， 所以血清学试验的特异 性较差， 且缺乏标准诊断试剂， 血清学试验仅在评价生殖支原 体与盆腔炎和不孕症的相关性研究中有应用。 发明内容 [0007]为解决上述背景技术中提到的不足， 本发明的目的在于提供一种检测泌尿生殖道 感染病原体核酸的DNA探针及其应用， 可快速、 廉价、 高灵敏度地检测沙眼衣原体、 淋病奈瑟 菌和生殖支 原体。说　明　书 1/5 页 3 CN 114790491 A 3