(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210358127.5 (22)申请日 2022.04.06 (71)申请人 集美大学 地址 361000 福建省厦门市集美区银 江路 185号 (72)发明人 刘静雯　张恩权　魏泽华　李桂玲　 李健　 (74)专利代理 机构 厦门创象知识产权代理有限 公司 35232 专利代理师 王凤玲　尤怀成 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/94(2006.01) (54)发明名称 与海 洋 球 石藻 病毒感 染 评 估 有关的 microRNA标志 物及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种与海洋球石藻病毒感染 评估有关的microRNA标志物及其应用， 该 microRNA标志物包括ehx ‑miR20‑5p、 ehv‑miR1‑ 3p、 ehv‑miR2‑3p、 ehv‑miR3‑3p、 ehv‑miR4‑3p、 ehv‑miR5‑3p、 ehv‑miR6‑5p、 ehv‑miR7‑5p中的一 种或几种， 这些标志物可以特异性地表征病毒感 染的整个过程， 对球石藻赤潮预警以及评估自然 海域中该藻病毒的感染活性具有潜在的应用价 值。 权利要求书1页 说明书8页 序列表4页 附图11页 CN 114672582 A 2022.06.28 CN 114672582 A 1.一种与海洋球石藻病毒感染评估有关的microRNA标志物， 其特征在于， 包括ehx ‑ miR20‑5p、 ehv‑miR1‑3p、 ehv‑miR2‑3p、 ehv‑miR3‑3p、 ehv‑miR4‑3p、 ehv‑miR5‑3p、 ehv‑ miR6‑5p、 ehv‑miR7‑5p中的一种或几种； ehx ‑miR20‑5p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 1所示， ehv‑miR1‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 2所示， ehv ‑miR2‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 3 所示， ehv ‑miR3‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 4所示， ehv ‑miR4‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID  NO： 5所示， ehv ‑miR5‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 6所示， ehv ‑miR6‑5p的核苷酸入列如 SEQ ID NO： 7所示， ehv ‑miR7‑5p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 8所示。 2.如权利 要求1所述的microRNA标志物在制备评估海洋球石藻病毒感染的试剂盒中的 应用。 3.如权利 要求2所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒包括根据所述microRNA标志物设 计的引物， 所述ehx ‑miR20‑5p的茎环引物如SEQ  ID NO： 9所示， 上游引物如SEQ  ID NO： 10所 示； 所述ehv ‑miR1‑3p的上游引物如SEQ  ID NO： 11所示； 所述ehv ‑miR2‑3p的上游引物如SEQ   ID NO： 12所示； 所述ehv ‑miR3‑3p的上游引物如SEQ  ID NO： 13所示； 所述ehv ‑miR4‑3p的上 游引物如SEQ  ID NO： 14所示； 所述ehv ‑miR5‑3p的上游引物如SEQ  ID NO： 15所示； 所述ehv ‑ miR6‑5p的上游引物如SEQ  ID NO： 16所示； 所述ehv ‑miR7‑5p的上游引物如SEQ  ID NO： 17所 示。 4.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒还包括内参， 所述内参的上游引 物如SEQ ID NO： 18所示， 下游引物如SEQ  ID NO： 19所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672582 A 2与海洋球石藻病毒感 染评估有关的microRNA标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及与海洋球石藻病毒感染评估有关的microRNA标志 物及其应用。 背景技术 [0002]海洋球石藻是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核微型浮游植物， 其中 球石藻Emilinia  huxleyi(Eh)具有形成 “球石粒”和高产二甲基硫化物(DMSP)的能力， 且几 乎每年都在大洋， 尤其是高纬度海域中形成大面积赤潮， 该藻形成的赤潮的迅速大规模消 亡被证实是特异性病毒(E.huxleyi  virus,EhVs)感染和裂解所致。 EhVs是一种大型核质双 链DNA病毒， 属于球石藻病毒属(Coccolithoviruses)。 该病毒与宿主之间具有高度的特异 性， 即只感染E.huxleyi， 且病毒在感染过程中存在属内竞争。 上述特征对浮游植物多样性 和种群结构具有很大影响， 改变着我们对浮游 植物种群动力学过程的认识。 因此， EhV ‑Eh的 互作过程是影响海洋碳、 硫生物地化循环及全球气候变化的重要环节， 并在重塑海洋生物 群落结构、 地质演变中具有重要地 位。 [0003]另外， 在E.huxleyi的生命周期中， 特别是被病毒感染条件下能够大量产生一种 “粘性”胶质物质， 即透明聚合物颗 粒(Transparent exopolymer  particles,TEP)。 TEP与其 他一些胞外聚合物是海底 “海雪”的重要组成部分。 球石藻病毒感染早期， 聚合物中约75％ 是被感染的宿 主藻细胞、 感染中期和晚期包含的感染细胞则分别为50％和0％， 这些被病毒 感染的细胞富集的聚集物可以捕获新产生的病毒粒子， 将它们输出到真光层以外， 并在赤 潮期间阻止病毒的进一步传播， 病毒 ‑球石藻‑TEP释放增加这一耦合过程促进了向下的碳 通量增加， 从而促进了碳沉降和生物泵的效率。 可见球石藻病毒的感染活性、 感染状态及其 感染规模在评估E.huxleyi ‑EhV体系对生物泵(BP)和微型生物碳泵(MCP)效率的贡献中具 有重要意 义。 [0004]miRNA与其作用的靶基因是响应生物和非生物环境胁迫的重要调控因子。 miRNA作 为关键因子在 复杂的病毒 ‑宿主互作网络中调控病毒的复制、 免疫逃逸及宿主抗病毒等过 程。 特别是作为一种小的非编码RNA， 其检测方法准确简单， 目前已成为哺乳动物病毒感染 诊断及治疗的新手段。 然而， 对于 miRNA在海洋浮游 植物生物及非生物胁 迫中的作用了解较 少。 发明内容 [0005]本发明旨在至少在一定程度上解决上述 技术中的技 术问题之一。 [0006]为此， 在本发明的第一个方面中， 本发明提出了一种与海洋球石藻病毒感染评估 有关的microRNA标志物， 包括ehx ‑miR20‑5p、 ehv‑miR1‑3p、 ehv‑miR2‑3p、 ehv‑miR3‑3p、 ehv‑miR4‑3p、 ehv‑miR5‑3p、 ehv‑miR6‑5p、 ehv‑miR7‑5p中的一种或几种； ehx ‑miR20‑5p的 核苷酸入列如SEQ  ID NO： 1所示， ehv ‑miR1‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 2所示， ehv ‑ miR2‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 3所示， ehv ‑miR3‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 4所 示， ehv‑miR4‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID NO： 5所示， ehv ‑miR5‑3p的核苷酸入列如SEQ  ID 说　明　书 1/8 页 3 CN 114672582 A 3