(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210373380.8 (22)申请日 2022.04.11 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 钱鹏旭　黄德玉　孙洁　韩颖丽　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 赵杭丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) (54)发明名称 急性髓性白血病诊断和治疗的生物标记物 及其应用 (57)摘要 本发明提供急性髓性白血病诊断和治疗的 生物标记物及其应用， 所述标志物为ADGRE1和 ADGRE2。 本发明通过生物信息 学挖掘分析及实验 研究证明， 所述标志物在多种人类急性髓性白血 病细胞系以及急性髓性白血病临床病人细胞中 都有显著高表达， 且在急性髓性白血病中的异常 高表达与病人不良预后都有显著相关性。 在体外 实验证明抑制所述生物标志物的表达均可抑制 急性髓性白血病细胞增殖， 诱导细胞凋亡、 分化 显著增加以及诱导细胞周期阻滞； 体内实验证明 抑制所述生物标志物的表达都能够显著缓解肿 瘤细胞在 小鼠体内的增殖以及 小鼠发病进展， 显 著延长小鼠生存时间。 可用来制备诊断急性髓性 白血病， 及在筛选治疗急性髓系白血病候选药物 中的应用。 权利要求书1页 说明书11页 序列表5页 附图5页 CN 114908165 A 2022.08.16 CN 114908165 A 1.急性髓性白血病诊断和治疗的生物标记物， 其特征在于， 所述生物标记物为ADGRE1 和ADGRE2， 所述生物标志物ADGRE1的序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述生物标志物ADGRE2的序 列如SEQ ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的生物标记物， 其特征在于， 所述ADGRE1的序列包括与SEQ  ID  NO.2所示基因具有85％ ‑99％同源性的基因， 所述ADGRE2的序列包括与SEQ  ID NO.1所示基 因具有85％ ‑99％同源性的基因。 3.权利要求1所述的生物标志物AD GRE1和AD GRE2在制备急性髓系白血病的诊断产品中 的应用， 其特征在于， 所述产品通过检测受试者样本中ADGRE1或ADGRE2的表达水平来诊断 急性髓系白血病。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述诊断产品为通过qRT ‑PCR、 原位杂交、 高通量测序平台检测ADGRE1或ADGRE2的表达水平的试剂。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述诊断产品为试剂盒， 所述试剂盒包括 特异性扩增ADGRE1或ADGRE2的引物， 其中特异性扩增ADGRE1的引物序列如SEQ  ID NO.5～6 所示， 特异性扩增ADGRE2的引物序列如SEQ  ID NO.3～4所示。 6.权利要求1所述生物标志物在筛选治疗急性髓系白血病候选药物中的应用， 其特征 在于， 所述 生物标志 物为ADGRE1和ADGRE2， 作为相互独立的生物标志 物。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述候选药物包括能够抑制ADGRE1或 ADGRE2活性的小分子化合物、 能够特异性地抑制 ADGRE1或ADGRE2表达的双链分子RNA或短 发夹shRNA， 或者是包含 所述双链分子RNA或短发夹shRNA的质粒或慢病毒， 或者以ADGRE1或 ADGRE2作为相互独立的生物标志 物制备的嵌合 抗原受体。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述特异性地抑制ADGRE1的双链分子RNA 或短发夹shRNA的序列如SEQ  ID NO.9～10所示， 所述特异性地抑制ADGRE2的双链分子RNA 或短发夹shRNA的序列如SEQ  ID NO.7～8所示。 9.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述受试者样本包括： 外周血、 骨髓穿刺样 本、 脑脊液、 血浆。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908165 A 2急性髓性白血病诊断和治疗的生物标记物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域， 涉及急性髓性白血病诊断和治疗的生物标记物及 其应 用， 具体而言， 是二种相互独立的急性髓系白血病诊断生物标志物ADGRE1和ADGRE2及其应 用。 背景技术 [0002]急性髓系白血病(Acute  myeloid leukemia,AML)是一组起源于髓系干、 祖细胞， 在免疫表型、 细胞及分子遗传学上高度异质性的恶性克隆性疾病， 也是我国患病率最高的 成人急性白血病， 占比超60％， 5年总生存率低于30％， 60岁以上患者5年生存率更是低于 20％， 并且AML的发病率随着年龄的增长而增加。 AML病程发展迅速， 患者存活率较差。 AML的 治疗选择有限， 目前仍以化疗为主， 但是化疗诱导的缓解的病人仍然有 70％会迎来复发， 并 演变为复发/难治性白血病而最终死亡。 而对于那些无法耐受强诱导化疗的老年患者， 中位 生存期更是只有5至10个月之间。 随着中国社会老龄化趋势的加重， 以及近年来AML发病 率 有年轻化及上升 趋势， AML对于国人的威胁也会逐渐加重 。 [0003]近来出现的AML精准靶向疗法为AML患者带来了曙光， 其主要包括3个方向： 小 分子 靶向药、 CAR ‑T疗法和抗体类药物。 我国科学家利用全反式维甲酸和三氧化二砷联合治疗急 性早幼粒细胞白血病， 使病人的五年生存率达到90％以上， 这是近30年来靶向治疗领域最 成功的案例， 提示基于特定发病机制的精准靶向药物是AML未来 发展的重要趋势。 但是目前 FDA批准的AML靶向药物还比较有限， 主要包括BCL ‑2抑制剂、 FLT3抑制剂、 IDH1/2抑制剂等。 随着这些靶向治疗药物的广泛使用， 针对这些抑制剂药物而 出现的耐药性和复发的问题也 越来越多被报道。 CAR ‑T疗法目前在淋巴系统肿 瘤和浆细胞肿 瘤应用广泛， 但是在AML中的 发展应用相对较为滞后， 突破性进展较少。 抗体类药物中靶向CD47、 CD70、 CD23、 CD33等的单 抗很多目前依然处在临床前研究阶段。 因此寻找新型AML治疗靶点仍是AML研究领域的热点 方向和临床重要问题。 [0004]G蛋白偶联受体(GPCR)是人类中最庞大的膜受体超家族。 FDA批准药物中的34％， 以及市售药物的27％都是以GPCR为作用靶点。 粘附性GPCR(Adhesion  GPCR， aGPCR)是药理 学中重要的GP CR分支。 研究报道 不同aGPCR成员参与了多种癌症如肺癌、 乳 腺癌、 结直肠癌、 前列腺癌、 等的发生发展， 表明aGPCR可能成为肿瘤诊断、 预后判断的潜在标志物和治疗靶 点。 但是目前aGPCR在AML中发挥的作用不清楚， 其能否成为AML的诊断和治疗靶点也未可 知， 并且目前市场上也没有一 款能针对aGPCR的小分子抑制剂。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供急性髓性白血病诊断和治疗的生物标记物， 所述标志物是 二种相互独立的急性髓系白血病诊断生物标志物， 即粘附性GPCR  ADGRE1和ADGRE2。 所述生 物标志物ADGRE1的序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述生物标志物ADGRE2的序列如SEQ  ID NO.1 所示。 所述ADGRE1 的序列包括与SEQ  ID NO.2所示基因具有85％ ‑99％同源性的基因， 所述说　明　书 1/11 页 3 CN 114908165 A 3