(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210444900.X (22)申请日 2022.04.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114540525 A (43)申请公布日 2022.05.27 (73)专利权人 中国人民解 放军军事科学院军事 医学研究院 地址 100071 北京市丰台区东大街20号 (72)发明人 焦俊　欧阳譞　熊小路　何培圣　 于永慧　付梦姣　赵明亮　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 王灏增 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) 审查员 武雪梅 (54)发明名称 一种检测或辅助检测鹦鹉热衣原体的引物 组合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了检测或辅助检测鹦鹉热衣原 体的组合物及其应用， 属于包含核酸或微生物的 检验方法中所用的组合物领域。 本发 明所要解决 的技术问题是如何高灵敏度和/或高特异性和/ 或快速/或简便地检测或辅助检测鹦鹉热衣原 体。 本发明提供了用于检测或辅助检测鹦鹉热衣 原体的引物组合物， 该引物组合物由核苷酸序列 分别是序列表的序列2和3所示的单链DNA分子组 成。 使用本发 明的检测或辅助检测鹦鹉热衣原体 的组合物用RAA扩增检测鹦鹉热衣原体， 快速且 高效， 扩增反应在15分钟内即可完成， 只需在恒 定温度就能完成大量扩增反应； 检测结果特异性 好、 灵敏度高； 鉴定方法简单方便， 适用于现场或 临床标本的快速 检测。 权利要求书1页 说明书8页 序列表3页 附图6页 CN 114540525 B 2022.08.02 CN 114540525 B 1.一种用于检测或辅助检测 鹦鹉热衣原体的引物探针组合物， 由正向引物F1、 反向引 物R3和探针组成； 所述正向引物F1为序列表的序列2所示的单链DNA分子； 所述反向引物R3为序列表的序列3所示的单链DNA分子； 所述探针的序列如序列4所示， 且5 ’端标记荧光素， 3 ’端添加延伸阻断基团， 在第 30‑31 位碱基之间增加一个四氢呋喃； 所述荧光基团为FAM或FITC； 所述的延伸阻断基团为磷酸基 团。 2.用于检测或辅助检测鹦鹉热衣原体的检测试剂， 其特征在于， 所述检测试剂包括权 利要求1所述的引物探针组合物。 3.如权利要求2所述的检测试剂， 其特征在于， 所述正向引物F1、 所述反向引物R3和所 述探针的摩尔比为1： 1： 0.3 。 4.一种检测或辅助检测鹦鹉热衣原体的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒含有权利要 求1所述的引物探针组合物或者含有权利要求2或3所述的检测试剂。 5.权利要求1所述的引物探针组合物在制备鹦鹉热衣原体检测试剂或试剂盒中的应 用。 6.权利要求2或3所述的检测试剂在制备鹦鹉热衣原体 检测试剂盒中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540525 B 2一种检测或辅助检测鹦鹉热衣原体的引物组合物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及包含核酸或微生物的检验方法中所用的组合物领域中一种检测或辅 助检测鹦鹉热衣原体的引物组合物及其应用。 背景技术 [0002]鹦鹉热衣原体 （ Chlamydia  psittaci ） 属于衣原体目 （ Chlamydiales ） 、 衣原体科 （Chlamydiaceae ） 、 衣原体属 （Chlamydia ） 中的一种革兰氏阴性、 严格细胞内寄生的微生物， 大小介于细菌和病毒之间， 主要靠空气和接触进 行传播， 是生物战剂的一种。 最初认为鹦鹉 是该病原体的宿主， 因而将其引起的疾病称为鹦鹉热 （psittacosis） ， 人类、 鸟类及一些哺 乳动物均易感。 带菌的鸟类或家禽、 含菌的分泌物或排泄物所污染的环境、 羽毛及尘埃均可 成为传染源。 人类感染鹦鹉热通常表现为高热、 恶寒、 头痛、 肌痛、 咳嗽等特征， 85%～90%患 者出现肺炎， 严重患者可并发心肌 炎、 心内膜炎、 肺水肿等。 [0003]血清学诊断以间接免疫荧光为主， 然而此方法在发病后1 ‑2周才能检测到鹦鹉热 衣原体抗体， 时效性差。 基于P CR原理的基因检测技术是鹦鹉 热衣原体分子生物学诊断的主 流方法， 但检测需要使用专业的仪器， 反应时间也较长， 且检测的敏感性有待提高， 并不能 适应临床的 “简便、 快速、 灵敏 ”的要求。 [0004]重组酶介导的核酸扩增 （Recombinase ‑aided Amplificat ion， RAA） 能在等温条件 下， 短时间内完成痕量核酸大量扩增， 是一种适合现场的 “简便、 快速、 灵敏、 精确 ”的基因扩 增检测方法。 RA A技术中， 引物和探针是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是如何高灵敏度和/或高特异性和/或快速/或简便地 鹦鹉热衣原体。 [0006]为解决上述 技术问题， 本发明提供了如下技 术方案。 [0007]本发明的第一个目的是提供用于检测鹦鹉热衣原体的引物组合物， 由正向引物F1 和反向引物R3组成； [0008]所述正向引物F1为如下(a1)或(a2)： [0009](a1)序列表的序列2所示的单链DNA分子； [0010](a2)将序列2经过一个或几个核苷酸 的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有 相同 功能的DNA分子； [0011]所述反向引物R3为如下(a3)或(a4)： [0012](a3)序列表的序列3所示的单链DNA分子； [0013](a4)将序列3经过一个或几个核苷酸 的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有 相同 功能的DNA分子 。 [0014]其中反向引物5 ’端标记生物 素 （Biotin） 。 正向引物和反向引物扩增完成后获得的 双链DNA将标记有生物素。说　明　书 1/8 页 3 CN 114540525 B 3