ICS 03.120 CCS C 04 DB4403 深 圳 市 地 方 标 准 DB4403/T 125—2020 DNA 档案制作技术规范 Technical regulation for the production of DNA profile 2020-11-23 发布 深圳市市场监督管理局 2020-12-01 实施 发 布 DB4403/T 125—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 缩略语 ............................................................................. 2 5 主要仪器和试剂 ..................................................................... 2 6 DNA 档案位点 ........................................................................ 2 7 制作流程 ........................................................................... 2 附录 A（资料性） 推荐 DNA 档案位点 ..................................................... 5 附录 B（资料性） DNA 档案知情同意书示例 ............................................... 8 附录 C（资料性） DNA 报告模板 ........................................................ 10 I DB4403/T 125—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由深圳市发展和改革委员会提出和归口。 本文件起草单位：深圳华大法医科技有限公司、深圳华大基因股份有限公司、深圳华大基因科技有 限公司。 本文件主要起草人：李栋、沈悦生、李博文、王秋娟、侯月兰、陈拓、郭小森、叶明芝、吴昊、姜 华艳、王洪琦、尹烨。 II DB4403/T 125—2020 DNA 档案制作技术规范 1 范围 本文件规定了 DNA 档案制作的主要仪器和试剂、DNA 档案位点、制作流程等内容。 本文件适用于深圳市公共安全领域中的人类 DNA 档案制作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 37223—2018 亲权鉴定技术规范 GB/T 37226—2018 法庭科学人类荧光标记 STR 复合扩增检测试剂质量基本要求 GA/T 383—2014 法庭科学 DNA 实验室检验规范 SF/Z JD0105002—2014 生物学全同胞关系鉴定实施规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA 档案 DNA profile 专业人员通过采集人体血液、毛囊、指甲、唾液、口腔上皮粘膜等含有 DNA 的样本，通过人类荧光标 记 STR 复合扩增技术，基于互联网云平台将相关个体的 DNA 基因分型原始数据存储于数据库中的一种身 份识别形式。 3.2 直接扩增 direct amplification 无需提取样本（血卡、血纸、毛囊、口腔脱落细胞等）的 DNA，直接进行 PCR 扩增的方法，简称直扩。 3.3 短串联重复序列 short tandem repeat 存在于人类基因组 DNA 中的一类具有长度多态性的 DNA 序列，其核心序列一般由 2～6 个碱基构成，由 于核心序列重复次数不同致个体间存在差异。 3.4 基因座 locus 基因在染色体上占有的特定位置，也称为“基因位点”或“位点”。一条染色体上含有许多基因座。 1 DB4403/T 125—2020 注：基因座英文的复数为 loci。 3.5 引物混合物 primer mix 一定数量的标记和未标记荧光的寡核苷酸引物按一定浓度比例混合而成的溶液。 3.6 等位基因分型标准物 allelic ladder 所有位点常见等位基因的混合物，用其来定义待检样本的分型。 3.7 分子量内标 internal lane size standard 一系列已知分子量大小、标定特定荧光的 DNA 片段混合物，用于计算同一泳道内的 DNA 片段分子量大 小，也称内标。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction） STR：短串联重复序列（Short Tandem Repeat） 5 主要仪器和试剂要求 5.1 主要仪器要求 DNA 档案制作所需的仪器应至少包括：移液器、扩增仪、旋涡混匀仪、小型离心机、遗传分析仪。仪器 应符合 GA/T 383—2014 的要求。 5.2 DNA 分型试剂要求 DNA 分型试剂应符合 GB/T 37226—2018 的要求或获取 GA 认证证书，兼容 DNA 数据库建设的位点。 6 DNA 档案位点 DNA 档案位点应符合 GB/T 37223—2018、SF/Z JD0105002—2014 中对 STR 位点及 STR 数据库信息的要 求，推荐 DNA 档案位点信息见附录 A。 7 制作流程 DNA 档案制作分 7 个步骤，具体流程见图 1。 2 DB4403/T 125—2020 图1 DNA档案制作流程图 7.1 签署知情同意书 知情同意书的签署符合以下要求： a) 知情同意书应含有 DNA 档案的基本功能、预期目的、技术方法、风险性和必要性，DNA 档案知 情同意书范本见附录 B； b) 本人、监护人或委托人理解并同意知情内容，签署知情同意书； c) 核实委托人身份信息并登记，本人签署知情同意书，可参考附录 B； d) 填写采样卡、样本袋上有关个人信息（身份证号、联系方式等个人信息必填）。 7.2 样本采集 7.2.1 概述 DNA档案常用人的血痕、口腔拭子等，但样本不限于此，理论上只要含有DNA均可作为样本。样本间 单独包装，不能互相接触，以免造成污染。另重复采集多个样本，分别用于检验、储存和核验。 7.2.2 血痕样本 DNA档案中常用的血痕样本的采集过程如下： a) 准备专用采血卡、医用纱布、采血滤纸、医用棉签、采血针、样本袋，并在样本袋上标明姓名、 身份证号等信息； b) 用酒精消毒手指、耳垂或足跟等采血部位，用采血针扎破，挤出血滴； c) 依次挤出 2～3 滴黄豆大小的血滴，依次散开摁在对应样本载体上，自然阴干后放入对应的样 本袋中； d) 将血痕自然阴干，不应使用吹风机吹干、暖气烘干或太阳晒干；不同的样本不能互相接触，以 免造成样本污染。为避免感染或其他意外，采样前必须清洁双手，采血针单人单用，采样后注 意止血消毒； e) 记录采样人和被采样人的确认程序。 7.2.3 口腔拭子样本 DNA档案中常用的口腔拭子样本的采集过程如下： a) 用清水漱口，保证口腔内无食物残渣； b) 用医用棉签，伸进口腔，在口腔内侧两颊处反复擦拭至少 15 次（不时旋转棉签）； c) 取出棉签，将棉签放在干净处自然阴干； d) 将阴干的棉签放入对应的样本袋中，在样本袋上标明样本信息； e) 记录采样人和被采样人的确认程序。 7.3 PCR 扩增 7.3.1 试剂准备 分型试剂包括 PCR 反应液、引物混合物、等位基因分型标准物、分子量内标、阳性对照、分子级水、 试剂说明书等。取出试剂，室温融化，振荡混匀，短暂离心备用。 3 DB4403/T 125—2020 7.3.2 检材准备 首先应在不损伤检材的前提下，对检材上的明显污垢、灰尘等杂质进行清洁，再根据样本类型的不 同使用对应的工具，如打孔器、手术剪等取适量检材直接放入 PCR 扩增管中备用。 7.3.3 PCR 扩增 PCR扩增应在符合GA/T 383—2014要求的实验室中进行，其具体步骤如下： a) 将完全融化后的 PCR 反应液和引物混合物漩涡震荡，短暂离心后使用； b) PCR 反应体系及 PCR 扩增程序按照试剂盒说明书操作； c) 扩增产物应该避光保存在温度低于 4 ℃的条件下，以防荧光淬灭以及 DNA 片段降解。 7.4 电泳检测 PCR扩增产物的毛细管电泳检测应在符合遗传分析仪制造商要求的环境中进行，其步骤如下： a) 预热遗传分析仪，使炉温至 60 ℃； b) 根据不同型号及试剂本身特点设置分析仪染料组合、上样电压、上样时间等参数； c) 电泳体系按照对应试剂盒说明书操作； d) 初次使用新试剂应对仪器进行光谱校正。 7.5 DNA 分型 对遗传分析仪产生的原始数据进行DNA分型的步骤如下： a) 使用与检测仪器配套的软件进行 DNA 分型，如为初次使用应导入对应试剂盒提供的 Panel， bins，Analysis method，以及内标片段长度； b) 导入遗传分析仪产生的原始数据，对 DNA 进行分型。 7.6 DNA 档案数据储存 DNA档案数据储存符合以下要求： a) DNA 档案应包含姓名、样本编号、身份证号码（如有）、DNA 档案生成日期及 DNA 分型信息等 内容，示例见附录 C； b) DNA 档案信息化数据应存储于有安全性保障的数据库或存储于拥有不少于 3072 个字节内存的 芯片卡，以便发放给本人使用。 7.7 DNA 分型数据查询 可选择以下三种方式之一，用于DNA档案结果告知： a) 纸质报告； b) 电子报告； c) 建设专门