ICS 65.020.01 CCS B 05 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1503—2021 玉米草地贪夜蛾抗药性监测技术规程 Technical code of practice for insecticide resistance monitoring of fall armyworm on maize 2021-12-14 发布 江西省市场监督管理局 2022-06-01 实施 发 布 DB36/T 1503—2021 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 试剂与材料 ........................................................................ 2 5 仪器设备 .......................................................................... 2 6 试验步骤 .......................................................................... 2 7 数据统计与分析 .................................................................... 3 8 抗药性水平计算与评估 .............................................................. 4 附录 A（资料性）部分杀虫剂对玉米草地贪夜蛾敏感品系的毒力基线 ......................... 5 I DB36/T 1503—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业农村产业发展服务中心、南昌大学、泰和县植保植检站、上高县植保 植检站、上犹县农业农村局、万安县植保植检站、吉州区植保植检站、江西省农业科学院农产品加工研 究所、江西省水产科学研究院、南昌市农业技术推广中心、江西省农业技术推广中心农业机械化技术研 究与推广监测处、永修县农业农村局、崇仁县农业农村局、永修县九合乡人民政府、共青城农林水务局。 本文件主要起草人：邹志文、王希、郭年梅、肖瑜红、况虹敏、余玉华、肖慧、桂良杰、熊慧薇、 周辉明、李文君、郭凌、舒娟、淦城、官友金、王芳、熊才国。 II DB36/T 1503—2021 玉米草地贪夜蛾抗药性监测技术规程 1 范围 本文件规定了浸叶法监测玉米草地贪夜蛾[Spodopterafrugiperda (J.E.Smith)]的抗药性，包括试 剂材料、仪器设备、试验步骤、数据统计与分析、抗药性水平计算与评估。 本文件适用于玉米草地贪夜蛾对杀虫剂抗药性监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 2361 蔬菜夜蛾类害虫抗药性监测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗药性 insecticide resistance 由于杀虫剂的使用，在草地贪夜蛾种群中发展并可以遗传给后代的对杀死正常种群药剂剂量的忍受 能力。 3.2 F1 代 F1 generation 从田间采集害虫的卵或幼虫，室内饲养，繁殖后得到的第一代幼虫。 3.3 敏感性基线 susceptibility baseline 通过生物测定方法得到的害虫敏感品系（或种群）对杀虫剂的剂量反应曲线。 3.4 浸叶法 leaf-dipping method 将浸过药液的叶碟置于含有琼脂或保湿滤纸上，接入靶标昆虫进行的生物测定方法。 4 试剂与材料 1 DB36/T 1503—2021 4.1 生物试材 试虫：草地贪夜蛾[Spodoptera frugiperda (J.E.Smith)]；供试植物：未被药剂污染的玉米。玉 米种植参照DB15/T 2166。 4.2 试验药剂 杀虫剂原药或母药。试剂为分析纯试剂。 5 仪器设备 电子天平（感量0.1mg），培养皿（直径5cm，高1.2cm），移液管或移液器（200μL、1000μL、5000 μL），打孔器（直径为1cm），烧杯（25mL，50mL，100mL），量筒（10mL，25mL，50mL，100mL），养 虫笼，剪刀，镊子，滤纸，恒温培养箱、恒温养虫室或人工气候箱。 6 试验步骤 6.1 试材准备 6.1.1 试虫 6.1.1.1 试虫采集 在监测田按抽样方法采集靶标昆虫幼虫或卵，幼虫不少于50头，卵块不少于10块。 6.1.1.2 试虫饲养 采集的幼虫或卵块在室内饲养到成虫分批产卵，取F1代3龄初期幼虫供试。 6.1.2 供试植物 使用新鲜、洁净、无农药污染的玉米叶片。 6.2 药剂配制 待测杀虫剂原药用丙酮或其它有机溶剂充分溶解，配制成高浓度存贮液。杀虫剂制剂用蒸馏水配制 成高浓度母液。然后用 0.05% Triton X-100 水溶液（质量浓度，下同）稀释至 6 个～8 个系列质量浓度。 系列质量浓度需根据预实验结果，按照等比例方法设置，使最低浓度时试虫死亡率小于 20%，最大浓 度时试虫死亡率大于 80%。每质量浓度配制药液量不少于 200mL。 6.3 处理方法 浸叶法，参照NY/T 2361。将清洗干净的玉米叶片浸于上述系列浓度的溶液中10s，取出后在室内晾 干至表面无游离水。用0.05%Triton X-100水溶液浸渍的叶片作为对照。将晾干的叶片放入培养皿中， 用滤纸或琼脂保湿，接入1头3龄初期幼虫。将其置于温度28°C，相对湿度70%，光周期（白天：黑夜） 12h:12h培养箱中单头饲养。每个浓度20头幼虫，重复3次。 6.4 结果检查 根据杀虫剂的速效性分别于接虫后48h～72h后检查。通常化学农药于接虫后48h检查，生物农药于 接虫后72h检查。死亡标准为：以小毛笔或尖锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视为死亡个体。 2 DB36/T 1503—2021 7 数据统计与分析 7.1 计算方法 根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后 两位： K P1 （%）= ×100 N ………………………………………（1） 式中： P1 ——死亡率，单位为百分率（%）； K ——表示每处理浓度总死亡虫数，单位为头； N ——表示每处理浓度总虫数，单位为头。 P2 （%）= Pt –Po ×100 100 - Po …………………………………（2） 式中： P2 ——校正死亡率，单位为百分率（%）； Pt ——处理死亡率，单位为百分率（%）； P0 ——空白对照死亡率，单位为百分率（%）。 若对照死亡率<5％，无需校正；对照死亡率在 5％～20％之间，应按公式（2）进行校正；对照死 亡率>20％，试验需重做。 7.2 回归方程和致死中浓度（LC50）计算方法 采用SAS、Probit等软件的机率值分析法，求出每种供试药剂的毒力回归方程式LC50值及其95％置信 限、斜率（b值）及其标准误。 8 抗药性水平计算与评估 8.1 草地贪夜蛾对部分杀虫剂的敏感性基线 见资料性附录A。 8.2 抗性倍数计算 根据敏感品系的LC50值和测试种群的LC50值，按公式（3）计算测试种群的抗性倍数，计算结果均保 留两位有效数字： RR= T ………………………………………………………（3） S 式中： RR ——测试种群的抗性倍数； T ——测试种群的 LC50 值； 3 DB36/T 1503—2021 S ——敏感品系的 LC50 值。 8.3 抗性水平的评估 根据抗性倍数的计算结果，按照表 1 中抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。 表1 玉米草地贪夜蛾抗性水平的分级标准 抗药性水平分级 4 抗性倍数（倍） 敏感 RR<3.0 敏感性下降 3.0 ≤ RR<5.0 低水平抗性 5.0 ≤ RR<10.0 中等水平抗性 10.0≤RR<40.0 高水平抗性 40.0≤RR<160.0 极高水平抗性 RR ≥ 160.0 DB36/T 1503—2021 附录A (资料性) 部分杀虫剂对玉米草地贪夜蛾敏感品系的毒力基线 表 A.1 部分杀虫剂对玉米草地贪夜蛾敏感品系的毒力基线 药剂 LC50(mg /L)（95%置信限） 斜率 ± 标准误 甲氨基阿维菌素苯甲酸盐 0.018 (0.014-0.024) 1.80±0.00 阿维菌素 1.720 (1.130-2.600) 1.39±0.17 氯虫苯甲酰胺 0.343 (0.270-0.436) 2.22±0.04 高效氯氟氰菊酯 0.245 (0.169-0.363) 1.20±0.18 溴氰虫酰胺 1.164 (0.707-1.916) 0.87±0.30 茚虫威 2.416 (1.785-3.270) 1.51±0.37 注：敏感种群于2019年采自南昌市进贤县。 _________________________________ 5