ICS13.020 CCSZ10DB36 江西省地方标准 DB36/T1841—2023 土壤3种四环素类抗生素的测定高效液 相色谱-三重四极杆质谱法 Determinationofthreetetracyclineantibioticsinsoilbyhighperformanceliquid chromatography-triplequadrupolemassspectrometry 2023-09-18发布 2024-03-01实施 江西省市场监督管理局发布 DB36/T1841—2023 I目  次 前言.................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4方法原理............................................................................1 5试剂和材料..........................................................................1 6仪器和设备..........................................................................2 7样品................................................................................2 8分析步骤............................................................................2 9结果计算与表示......................................................................3 10精密度和正确度.....................................................................5 11质量保证和质量控制.................................................................5 12废物处理...........................................................................6 附录A（规范性）方法的检出限和测定下限.................................................7 附录B（资料性）五家实验室的精密度和正确度汇总.........................................8 附录C（资料性）质谱参考条件..........................................................10 参考文献.............................................................................11 DB36/T1841—2023 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由江西省生态环境厅提出并归口。 本文件主要起草单位：江西省生态环境监测中心，江西省新余生态环境监测中心。 本文件主要起草人：赵佳文、乔支卫、彭刚华、张振欣、欧阳涛、高明、刘燕红、曾芳发、敖磊、 陈美芬、彭惠琛、肖满成、李晓燕、欧丽。 DB36/T1841—2023 1土壤3种四环素类抗生素的测定高校液相色谱-三重四极杆质谱法 1范围 本文件规定了测定土壤中3种四环素类抗生素的测定高效液相色谱-三重四级杆质谱法原理、试剂材 料、仪器设备、样品采集和制备、分析测试和质量控制等技术内容。 本文件适用土壤中金霉素、土霉素和四环素的测定，方法检出限和测定下限详见附录A。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 HJ613土壤干物质和水分的测定重量法 HJ/T166土壤环境监测技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4方法原理 使用乙腈与EDTA-Mcllvaine缓冲液，经水平振荡提取土壤样品中四环素类抗生素，提取液经冷冻 离心后通过固相萃取柱净化，经浓缩后待测，使用高效液相色谱-三重四级杆质谱法，电离方式为ESI(+)， 采用多反应监测(MRM)模式进行测定，采用外标法定量。 5试剂和材料 5.1实验用水：电阻率≥18MΩ·cm，其余指标应符合GB/T6682中表1的一级标准。 5.2盐酸：优级纯。 5.3盐酸溶液：ρ（HCl）=0.5mol/L。准确量取4.17ml盐酸（5.1）用实验室去离子水定容至100ml。 5.4乙腈：优级纯。 5.5甲醇：优级纯。 5.6甲酸：优级纯。 5.70.1%甲酸水溶液：准确移取1.0mL甲酸加入1000mL水中，混匀。 5.80.1%甲酸乙腈溶液：移取1.0mL甲酸加入1000mL乙腈中，混匀。 5.9金霉素、土霉素、四环素：有证标准物质含量（99%以上）。 5.10金霉素、土霉素、四环素标准贮备液（100mg/L）：称取0.0100g金霉素、土霉素、四环素（5.9）， 用甲醇（5.5）溶解并定容至100mL；于4℃冷藏、避光保存，或市售有证标准溶液。 DB36/T1841—2023 25.11金霉素、土霉素、四环素标准使用液（100μg/L）：移取100.0μL金霉素、土霉素、四环素标准 贮备液（5.10），用甲醇（5.5）定容至100mL。 5.12样品提取液（Mclvaine缓冲溶液：乙腈=7:3）：称取磷酸氢二钠27.6g，柠檬酸12.9g，乙二胺 四乙酸二钠盐37.2g，调节pH约等于2，用水溶解后稀释并定容至1000mL；移取Mclvaine缓冲溶液 350mL，用乙腈稀释定容至500mL。 5.13固相萃取柱：规格为6mL/500mgHLB柱。 5.14氮气：纯度≥99.999%。 5.15石英砂。 6仪器和设备 6.1高效液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI）或其他等效离子源。 6.2分析天平：精度为0.0001g。 6.3浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他类型的等性能相当的设备。 6.4固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。 6.5色谱柱：C18高效液相色谱柱（规格2.1mm×100mm，1.7μm）或其他性能相近的色谱柱。 6.6HY-2A调速多用振荡器。 6.7高速冷冻离心机。 6.8移液枪：5μL、10μL、20μL、50μL、100μL。 6.9冷冻干燥仪。 6.10涡旋振荡器。 7样品 7.1样品的采集和保存 样品采集参照HJ/T166的相关规定执行，采集具有代表性的土壤样品，立即置于棕色磨口玻璃瓶中， 用锡箔纸封口于4℃条件下冷藏。7d内完成提取，提取液在30d内完成分析工作。 7.2样品的制备 7.2.1土壤的冻干：将采集的样品挑除石块树枝，挖出装入培养皿中并用保鲜膜密封置于冻干机上冻 干48h以上，冻干量一般为分析用量的3倍以上为宜。 7.2.2干物质含量的测定：按照HJ613测定土壤样品干物质含量。 7.2.3土壤中抗生素提取：称取2.0g冷冻干燥土壤样品于50mL离心管中，加入样品提取液（5.12） 10mL，置于调速多用振荡器（6.6）中振荡45min，在4500r/min条件下冷冻离心10min后收集上 清液，重复提取2次，然后加去离子水稀释至200mL，待净化。 7.2.4净化：依次用3mL甲醇（5.5）、3mL0.5mol/LHCl（5.3）溶液、3mL水活化HLB固相萃 取小柱（5.13），以5mL/min速度将提取液或待净化液通过固相萃取柱，然后依次用5mL5%甲醇溶 液、5mL水淋洗固相萃取柱。真空泵抽干萃取柱，保持30min，最后用5mL甲醇洗脱，洗脱液在氮吹 仪浓缩至小于1mL后，用1mL甲醇定容，涡旋溶解5min，过0.22μm滤膜后测定。 8分析步骤 DB36/T1841—2023 38.1仪器参考条件 8.1.1高效液相色谱仪参考条件见表1和表2。 表1高效液相色谱仪分析条件 流动相 A：0.1%甲酸溶液（4.6）B：0.1%甲酸乙腈（4.7） 流速 0.2mL/min 柱温 30℃ 进样体积 2.0μL 表2梯度洗脱程序 时间（min） 流动相A(%) 流动相B(%) 0 90 10 1 90 10 5 40 60 6 5 95 8 90 10 8.1