ICS 65.150 CCS GDSF B 50 广东水产学会 团体 标准 T/GDSF 0003—2023 罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌双重荧光 PCR检测方法 Duplex Real -time PCR Method for the Detection of Streptococcus agalactiae and Streptococcus iniae in Tilapia 2023 - 9- 4发布 2023 - 9 -5实施 广东水产学会 发布 全国团体标准信息平台 T/GDSF 0003 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................ III 1 范围 ................................ ................................ ................ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ...... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ .......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ .............. 1 5 试剂和耗材 ................................ ................................ .......... 1 试剂 ................................ ................................ .............. 1 引物和探针 ................................ ................................ ........ 1 6 仪器设备 ................................ ................................ ............ 2 7 样品采集与处理 ................................ ................................ ...... 2 样品采集 ................................ ................................ .......... 2 7.1.1 采样工具 ................................ ................................ ........ 2 7.1.2 待检样本 ................................ ................................ ........ 2 7.1.3 样品运输 ................................ ................................ ........ 2 样品前处理 ................................ ................................ ........ 2 7.2.1 池塘水样品前处理 ................................ ................................ 2 7.2.2 环境拭子前处理 ................................ ................................ .. 2 7.2.3 细菌培养物 ................................ ................................ ...... 2 7.2.4 组织样品前处理 ................................ ................................ .. 2 8 操作方法 ................................ ................................ ............ 2 DNA提取 ................................ ................................ ........... 3 反应体系的配制 ................................ ................................ .... 3 加样 ................................ ................................ .............. 3 荧光PCR反应 ................................ ................................ ...... 3 8.4.1 上机 ................................ ................................ ............ 3 8.4.2 循环条件设置 ................................ ................................ .... 3 8.4.3 荧光通道设定 ................................ ................................ .... 3 9 结果判定 ................................ ................................ ............ 3 阈值设定 ................................ ................................ .......... 3 质控标准 ................................ ................................ .......... 3 结果描述及判定 ................................ ................................ .... 3 附录 A （规范性） 溶液配置 ................................ ........................ 5 A.1 0.01 mol/L PBS(pH 7.2) 溶液的配置 ................................ .................. 5 A.2 阳性对照 ................................ ................................ .......... 5 A.3 阴性对照 ................................ ................................ .......... 5 附录 B （规范性） 引物、探针的名称、序列和工作浓度 ................................ 6 全国团体标准信息平台 T/GDSF 0003 —2023 II B.1 引物、探针的名称、序列和工作浓度 ................................ .................. 6 附录 C （规范性） DNA提取试剂盒方法 ................................ .............. 7 C.1 DNA提取方法 ................................ ................................ ....... 7 全国团体标准信息平台 T/GDSF 0003 —2023 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东水产学会提出并归口。 本文件起草单位：东莞市动物疫病预防控制中心、广东加和检测技术服务有限公司、广东加和生物 技术有限公司、广东海大畜牧兽医研究院有限公司、东莞市石排镇农业技