ICS 65.020.30 CCS B 001 贵 52 2 州 省 地 方 标 准 DBB52/T 166 61—20222 地 地方鸡 鸡资源 源场禽 禽白血 血病净 净化技 技术规 规程 2022 - 03 - 03 发布 发 2022 - 06 0 - 01 实施 实 贵州省市场 贵 场监督管理 理局 发 布 DB52/T 1661—2022 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 3 2 规范性引用文件 ..................................................................... 3 3 术语和定义 ......................................................................... 3 4 养殖条件与要求 ..................................................................... 4 5 检测条件 ........................................................................... 4 6 净化流程与方法 ..................................................................... 4 7 种蛋选留与孵化 ..................................................................... 5 8 净化效果与评估 ..................................................................... 5 9 无害化处理 ......................................................................... 5 10 养殖档案记录 ...................................................................... 5 附录 A（规范性） 主要试剂与主要仪器 ................................................... 6 附录 B（资料性） 养殖档案记录 ......................................................... 7 I DB52/T 1661—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由贵州省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：贵州省畜牧兽医研究所、贵州省畜禽资源管理站、榕江县农业农村局、贵州省榕 江山农发展有限责任公司。 本文件主要起草人：文正常、王璇、唐继高、张芸、潘淑惠、王永春、张杨子、冉江、姜兆芳、 黎恒铭、沈德林、刘嘉、明炜、陈亚亚、吴玙彤。 II DB52/T 1661—20222 地方鸡 鸡资源场 场禽白血病 病净化技 技术规程 程 1 范围 本文 文件规定了贵 贵州地方鸡资 资源场禽白血 血病净化养殖 殖条件与要求、检测条件、 、净化流程与 与方法、种蛋 蛋 选留与孵 孵化、净化效 效果与评估、无害化处理 理和养殖档案记录等。 本文 文件适用于贵 贵州地方鸡资 资源场。 2 规范性引用文件 列文件中的内 内容通过文中 中的规范性引 引用而构成本文件必不可少 少的条款。其 其中，注日期的 的引用文件， 下列 仅该日期 期对应的版本 本适用于本文 文件；不注日 期的引用文件 件，其最新版 版本（包括所 所有的修改单 单）适用于本 本 文件。 空气质量标准 准 GB 3095 环境空 析实验室用水 水规则和试验 验方法 GB/T 6682 分析 料卫生标准 GB 13078 饲料 禽养殖业污染 染物排放标准 准 GB 18596 畜禽 禽 断技术 GB/T 26436 禽白血病诊断 禽场环境质量 量标准 NY/T 388 畜禽 白血病病毒p2 27抗原酶联免 免疫吸附试验 验方法 NY/T 680 禽白 饮用水水质 NY 5027 畜禽饮 华人民共和国 国农业部农医 医发〔2017〕 25号 病死 死及病害动物无 无害化处理技 技术规范 中华 3 术语和定义 列术语和定义 义适用于本文 文件。 下列 3.1 贵州 州地方鸡 被列 列入《国家地 地方畜禽品种 种资源目录》 原产于贵州的地方鸡品种 种。 3.2 资源 源场 从事 事地方鸡品种 种资源保护或 或提纯复壮的 的养殖场。 3.3 禽白 白血病净化 在贵 贵州地方鸡养 养殖场或指定 定区域内，对通 通过持续监测 测禽白血病阳 阳性感染的地 地方鸡种群，经多代次阳 性检测筛 筛查，淘汰感 感染阳性个体 体以实现根除 除禽白血病的过程。 3.4 禽白 白血病病毒 p27 p 抗原 p27抗原为禽白血 血病病毒衣壳 壳蛋白，该蛋 蛋白在各亚群 群之间具有高 高度的同源性 性和保守性，为群特异性 性 禽白血病外源 源性病毒和“ “E”亚群内源 源性病毒，在 在感染细胞后 后都可产生。 抗原，禽 3 DB52/T 16661—2022 3.5 禽白血 血病 Ab 和 J 亚群病毒 亚 Ab和J亚 亚群病毒为外 外源性禽白血 血病病毒的两 两个不同亚群 群,对禽具有较 较强的致病性 性。 4 养殖条件 件与要求 4.1 资源场 场养殖环境空 空气质量应符 符合 GB 3095 的规定；饲料卫生应符合 合 GB 13078 的规定；饮用 用水水质 应符合 NY 55027 的要求 求；场环境质量 量应符合 NYY/T 388 的要 要求。 4.2 对实施 施净化的核心 心种鸡群要单 单独分区隔离 离饲养并远离 离其他鸡群，安排专职人员 员管理。 4.3 对净化 化鸡群使用弱 弱毒疫苗的质 质量规范做到 到疫苗无外源 源性禽白血病毒污染。 4.4 场区消 消毒每周不少 少于 2 次。 4.5 每天及 及时清除粪污 污，并对粪便 便做无害化处 处理。 5 检测条件 件 5.1 5.2 6 检测实 实验室用水规 规则和检测方 方法应符合 GGB/T 6682 规定。 规 主要试 试剂与主要仪 仪器见附录 A。 A 净化流程 程与方法 6.1 净化流 流程 群完成生产和 6.1.1 根据 据资源场种群 群规模，选定 定一定数量的 的拟净化核心 心基础种群，对净化种鸡群 和繁育性 能测定后，采集每只鸡的血清和泄殖 殖腔棉拭子并 并标记，用禽 禽白血病 Ab 和 J 亚群抗体 体 ELISA 检测 测试剂盒 进行血清感 感染抗体阳性 性检测，同时用 用禽白血病抗 抗原 ELISA 检测试剂盒和 检 胶体金快速检 检测试纸条进 进行血清 和泄殖腔棉 棉拭子进行 ALLV p27 抗原交 交叉检测。淘 淘汰阳性鸡，阴性种鸡人 人工授精后收 收集种蛋孵化 化。 6.1.2 对阴 阴性种鸡繁育 育的第一世代 代 1 日龄雏鸡 鸡（出壳 24 小时以内）全 小 全部采集胎粪 粪并标记，用禽 禽白血病 抗原 ELISA 检测试剂盒 盒和胶体金快速 速检测试纸条 条进行 ALV p27 p 抗原交叉 叉检测，按全 同胞淘汰阳性 性雏鸡及 其对应的种 种母鸡，阴性 性雏鸡按全同胞 胞上笼育雏和 和育成。 6.1.3 第一 一世代净化种 种鸡开产初期 期，全群采集 集鸡血清和泄 泄殖腔棉拭子，用禽白血病 病抗原 ELIS SA 检测试 剂盒和胶体 体金快速检测试纸条进行 ALV p27 抗原 原交叉检测；公鸡采集精 精液用 PCR 方 方法进行 ALV p27 抗原 检测。淘汰 汰阳性鸡。 取 2 枚种蛋的蛋清， 6.1.4 在留 留种前的第 28 2 周龄～30 周龄，全群采 采集鸡泄殖腔 腔棉拭子，同时每只母鸡取 用禽白血病 病抗原 ELISA 检测试剂盒和 和胶体金快速 速检测试纸条 条进行 ALV p27 抗原交叉 叉检测；采集公 公鸡精液 用 PCR 方法 法进行 ALV p227 抗原检测。淘汰阳性鸡 鸡，阴性种鸡 鸡进行人工授 授精，收集种 种蛋进行孵化 化。 6.1.5 在完 完成第一世代 代的禽白血病 病检测与净化 化后，对 2～ ～3 个世代次 次的鸡群禽白血 血病检测与净 净化从 1 日龄雏鸡开 开始，重复 6.1.2～6.1.4 4 操作步骤。 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 4 样品采 采集与处理 无菌 菌采集鸡泄殖 殖腔棉拭子加 加入 1 mL 样品 品稀释液后，反复冻融 3 次待检。 鸡翅 翅静脉无菌采 采血，用高速 速离心机分离 离血清样品用 用于检测。 每只 只种母鸡收集 集 2 枚种蛋，每枚种蛋吸 吸取 1 mL 蛋清 清，-20 ℃反复冻融 3 次后 后用于检测。 。 将种 种公鸡泄殖腔 腔周围用酒精 精棉球擦拭干 干净，轻轻按 按摩其腹部至 至尾部，待泄殖 殖腔外翻时，轻轻挤 DB52/T 1661—20222 压泄殖腔 腔外缘，将精 精液接入装有 有 1 mL 稀释液 液（含青链霉 霉素的灭菌 PBS P 液）的灭 灭菌离心管中 中，混匀后， 离心取上 上清液用于检 检测。 6.2.5 当天收集出壳 壳雏鸡胎粪， ，用灭菌指形 形管按鸡只个 个体分别收集 集样品，加入 入 1 mL 的样品 品稀释液，轻 轻 雏鸡的腹部，排出胎粪，装进样品管 管中，用洁净 净小棒搅动指 指形管里胎粪 粪，待混匀经 经反复冻融 3 轻挤压雏 次后吸取 取上清用于检 检测。 6.3 检测净化技术 6.3.1 6.3.2 6.3.3 6.4 毒 p27 抗原酶 酶联免疫吸附 附试验方法应 应符合 NY/T 680 的要求。 。 禽白血病病毒 禽白血病病毒 毒 p27 抗原 PCR 特异性检 检测方法符合 合 GB/T 2643 36 的规定。 禽白血病病毒 毒抗原快速检 检测试纸条的 的操作方法