ICS 65.020 CCS B 16 湖 DB43 南 省 地 方 标 准 DB43/T 1 95 0—2020 十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测 技术规程 Technical regulation of insecticide resistance monitoring of lepidopterous insect pests on cruciferous vegetables 2020-12-29发布 湖南省市场监督管理局 2021-03-29实施 发 布 DB43/T 1950—2020 目 次 前言························································································································ Ⅲ 1 范围 ····················································································································· 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 3 术语和定义 ············································································································ 1 4 试剂与材料 ············································································································ 2 5 仪器设备 ··············································································································· 2 6 试验步骤 ··············································································································· 3 7 数据统计与分析 ······································································································ 4 8 抗性水平评估 ········································································································· 4 9 监测档案 ··············································································································· 5 附录 A（资料性） 斜纹夜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（点滴法） ······································ 6 附录 B（资料性） 甜菜夜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（夹毒叶片法） ································ 7 附录 C（资料性） 小菜蛾对部分杀虫剂敏感毒力基线（浸叶法） ········································· 8 附录 D（资料性） 十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测档案 ··············································· 9 I DB43/T 1950—2020 II DB43/T 1950—2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省植物保护研究所、长沙县农业农村局、湖南农业大学、郴州市农业科学研 究所、邵阳市植保植检站、桃江县植保植检站。 本文件主要起草人：符伟、刘箐、彭可为、唐涛、王培、周玲红、彭智伟、马明勇、丁朝辉、魏林、 张卓。 III DB43/T 1950—2020 IV DB43/T 1950—2020 十字花科蔬菜鳞翅目害虫抗药性监测技术规程 1 范围 本文件规定了小菜蛾（Plutella xylostella Linnaeus）、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua Hiibner）、斜纹夜 蛾（Spodoptera litura Fabricius）抗药性监测的术语和定义、试剂与材料、仪器设备、试验步骤、数据 统计与分析、抗性水平评估及监测档案。 本文件适用于小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾对常用杀虫剂的抗药性监测。其它十字花科蔬菜鳞翅目 害虫抗药性监测参照本标准执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 1154.1 农药室内生物测定试验准则 第 1 部分：点滴法 NY/T 1154.2 农药室内生物测定试验准则 第 2 部分：夹毒叶片法 NY/T 1154.14 农药室内生物测定试验准则 第 14 部分：浸叶法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗药性 insecticide resistance 原来易感某种杀虫剂的昆虫种群，不再能被该剂常用量杀死的特性。 3.2 敏感基线 susceptibility baseline 通过生物测定方法得到的害虫敏感品系（或种群）对杀虫剂的剂量反应曲线。 3.3 致死中浓度（LC50） median lethal concentration 药剂杀死生物群体中一半个体所需要的浓度。 3.4 点滴法 topical application method 将定量的药剂滴在昆虫体壁的一定部位，使药剂透过表皮进入体内，以测定药剂触杀效果的生物测 定方法。 3.5 夹毒叶片法 leaf-sandwich method 将定量的药剂夹入叶面，使药剂通过昆虫取食进入体内，以测定药剂喂毒效果的生物测定方法。 1 DB43/T 1950—2020 3.6 浸叶法 leaf-dipping method 将浸过药液的叶碟置于含有琼脂或保湿滤纸上，接入靶标昆虫，以测定药剂触杀和喂毒效果的生物 测定方法。 4 试剂与材料 4.1 试剂 试验试剂主要为： ——丙酮 ——乙醇 ——Triton X-100 ——蒸馏水 4.2 生物试材 4.2.1 供试昆虫 供试昆虫为： ——小菜蛾，田间采集，经室内饲养的 F1 代大小一致的 3 龄幼虫； ——甜菜夜蛾，田间采集，经室内饲养的 F1 代大小一致的 3 龄幼虫； ——斜纹夜蛾，田间采集，经室内饲养的 F1 代大小一致的 3 龄幼虫。 4.2.2 供试植物 未被药剂污染的甘蓝。 4.2.3 试验药剂 原药或母药。 5 仪器设备 试验仪器设备主要为： ——电子天平（感量 0.1mg） ； ——烧杯； ——培养皿； ——容量瓶； ——养虫笼； ——毛细管点滴器（1µL） ； ——电子微量点滴器； ——浸虫器； ——打孔器； ——移液管或移液器； ——恒温培养箱或人工气候箱。 2 DB43/T 1950—2020 6 试验步骤 6.1 试材准备 6.1.1 试虫采集与饲养 6.1.1.1 试虫采集 选择具有代表性的十字花科菜地 2 块～3 块采集小菜蛾、甜菜夜蛾或斜纹夜蛾幼虫或蛹 200 头以上， 置于事先放置寄主植物叶片的养虫盒中，供室内饲养。 6.1.1.2 试虫饲养 在室内用寄主植物将田间采集的幼虫或蛹饲养到成虫分批产卵，取 F1 代 3 龄幼虫供试。 6.1.2 叶碟制作 使用新鲜、洁净、无农药污染的甘蓝叶片，并制成直径 5cm 的圆片供试。 6.2 药剂配制 6.2.1 原药用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）溶解配成母液。 6.2.2 用含 0.05％ Triton X-100 的蒸馏水稀释杀虫药剂母液成系列梯度浓度（通过预实验确定药剂 的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于 20％，最大浓度时死亡率大于 80％）。其他参照 NY/T 1154.1、 NY/T 1154.2 和 NY/T 1154.14 执行。 6.3 处理方法 6.3.1 点滴法 将微量点滴器的注射器用溶解清洗数次，调节点滴器至备用状态。视试虫大小的种类及大小具体选 用点滴量。用毛笔选取整齐一致的 3 龄幼虫，放入培养皿中。将培养皿中试虫逐头进行点滴处理，点滴 部位在幼虫前胸背板。先处理对照（不含药剂的相应的有机溶剂的处理），然后按试验剂量从低到高的 顺序重复上述操作，每个培养皿中 10 头，重复 4 次。 6.3.2 夹毒叶片法 6.3.2.1 夹毒叶碟制作 用玻璃毛细管点滴器从低浓度开始，每片叶碟点滴 1µL～2µL 药液，待溶剂挥发后与另一片涂有面 粉糨糊的叶碟对贴，放于 6cm 培养皿中。每处理 4 次重复，每重复不少于 12 个夹毒叶片，并设不含药 剂的相应的有机溶剂的处理为对照。 6.3.2.2 接虫处理 每个培养皿接 1 头试虫，置于正常条件下饲养。接虫 2h～4h，待试虫取食完含药叶碟后，在培养 皿中加入清洁甘蓝叶片继续饲养至调查，淘汰未食完一张完整叶碟的试虫。 6.3.3 浸叶法 将清洗干净的甘蓝叶片浸于不同浓度的溶液 10s，取出后在室内晾干至表面无游离水。用 0.05 ％ 3 DB43/T 1950—2020 Triton X-100 水溶液浸渍的叶片作为对照。将晾干的叶片放入培养皿中，用滤纸或琼脂保湿，接入 3 龄幼虫，每个培养皿中 10 头，重复 4 次。 6.4 结果检查 处理后 48h 检查试虫死亡情况，分别记录总虫数和死虫数。根据药剂特点，可以缩短或延长检查时 间。 7 数据统计与分析