ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28977—2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法 Detection and identification of Aphelenchoides ritzemabosi(Schwartz) Steiner & Buhrer 2012-12-31发布 2013-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T28977—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：宁波检验检疫科学技术研究院、广东出人境检验检疫局检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：顾建锋、王江岭、张慧丽、赵立荣、陈先锋、闻伟刚。 GB/T28977—2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了菊花滑刃线虫的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物和繁殖材料、介质、土壤中菊花滑刃线虫的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T24829毛刺线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 3菊花滑刃线虫基本信息 学名Aphelenchoidesritzemabosi(Schwartz,1911)Steiner&Buhrer,1932。 英文名chrysanthemum foliar nematode、chrysanthemum leaf nematode,bud and leaf nematode of chrysanthemum,foliar nematode of chrysanthemum 或 chrysanthemum eelworm。 中文名又称菊花叶线虫、菊花芽线虫、菊花叶芽线虫、腋芽滑刃线虫、菊花叶枯线虫或里泽马博斯滑 刃线虫。 属滑刃目Aphelenchida，滑刃科Aphelenchoididae，滑刃属Aphelenchoides。 菊花滑刃线虫是植物专性寄生线虫，主要外寄生或内寄生于多种寄主植物的芽、叶或花，也可存活 于种子及土壤中，主要通过植物繁殖材料和鲜切花等进行远距离传播 相关种类有草莓滑刃线虫A.fragariae（RitzemaBos）Christie、水稻干尖线虫A.besseyiChristie 和毁芽滑刃线虫A.blastophthorusFranklin等。 菊花滑刃线虫的其他信息参见附录A。 4方法原理 根据菊花滑刃线虫的危害状，在检疫现场肉眼观察，选取变色、畸形的花、叶、芽以及根际介质或土 壤，用直接浸泡法或漏斗法等进行线虫分离，用显微镜观察，根据形态特征对种类进行判定。雌虫尾尖 突和雄虫交合刺形态是重要的种类鉴定依据。 5器材与试剂 见GB/T 24829。 6症状检查 现场检疫时要注意观察植株花、叶、芽等是否有枯死、褐色角斑、矮小、畸形等受害症状（参见附录 1 GB/T 28977—2012 A），以及是否带介质、土壤等。重点选取表现上述症状的花、叶、芽等植物组织及根际介质或土壤，如无 可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测。 7实验室检验 7.1线虫分离 中。种子、花、叶、芽、茎等可用直接浸泡法或漏斗法分离线虫，介质或土壤适宜用漏斗法或浅盘分离法 等分离线虫（参见GB/T24829）。 7.2体视显微镜镜检 菊花滑刃线虫体长约1000μm，放大10倍以上可见。虫体细长，在水中不停作“S”形扭动，行动 活跃。 7.3标本制作 若镜检发现线虫，需制作临时玻片或永久玻片（参见GB/T24829）。 7.4生物显微镜观察、摄影和测量 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，主要鉴定特征包括雌虫尾尖突形态、后阴子宫 囊、尾形、口针、侧线、排泄孔和神经环位置、雄虫交合刺等。应在每张图片上加相应标尺，测量并计算 a、b、b"、c、c、V等值。如样品足够，应测量雌、雄虫各15条以上。 8形态学鉴定 8.1滑刃属线虫形态鉴定特征 雌虫：体长0.5mm~1.2mm，热杀死后虫体直或略腹弯；头部高圆，常有明显缩，头架骨化弱； 口针细弱，长约10μm～12μm，不超过20μm；中食道球发达，瓣门显著；雌虫阴门位于虫体中后部，一 在，并含有精子：尾圆锥形，有或无尾尖突，尾尖突形态多变 雄虫：热杀死后尾端强烈腹弯，整个虫体呈“J”形；交合刺玫瑰刺状、成对、不愈合；基顶和喙通常发 达，有时缺；尾乳突通常3对，无交合伞。 8.2菊花滑刃线虫测计值 测计值见表1。 表1菊花滑刃线虫测计值 特征 菊花滑 后阴子宫 L 体宽 刃线虫 囊长 b 6' c V或T a mm μm um 雌虫 0.77~1.2016.5~19.5115~147 40.0~60.58.1~13.0 4.5~6.116.0~23.13.7~5.166.0~75.0 2 GB/T28977—2012 表1(续) 特征 菊花滑 后阴子宫 L 体宽 刃线虫 囊长 b 6' V或T mm μm μm 雄虫 0.63~0.9316.0~19.2 31.0~53.310.0~14.04.3~5.016.0~30.02.8~3.1 35.0~64.0 注1：L=体长；a=体长/最大体宽；b=体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离；6"=体长/虫体前端至食道腺末 端的距离：c=体长/尾长：c=尾长/肛门处体宽；St=口针长：V=虫体前端至阴门的距离×100/体长：T= 泄殖腔口至精巢末端的距离×100/体长。 注2：表内数据综合参考Allen，1952；Vovlas等，2005；Chizhov等，2006；Crozzoli等，2008。 8.3菊花滑刃线虫形态鉴定特征 雌虫：虫体细长，0.7mm~1.2mm体环明显（宽为0.9μm~1.0μm），侧区为体宽的六分之一至 五分之一，侧线4条；头部近半球形，缢缩明显，头架骨化弱；口针细弱，针锥部急剧变尖，基部球小而明 显，食道前体部较细，中食道球发达、卵形，瓣门显著，背、腹食道腺开口于中食道球；食道腺长叶状，背覆 盖肠，长约4倍体宽；食道与肠交接处位于中食道球后约8μm处，神经环位于中食道球后约1.5倍体 宽处，排泄孔位于神经环后约0.5～2倍体宽处；单卵巢前伸，卵母细胞多行排列；阴门横裂，阴门唇梢突 起：后阴子宫囊发达，长度超过肛阴距的1/2，通常含有精子；尾长圆锥形，末端有2～4个尾尖突，使尾 端侧面观呈刷状。 雄虫：较常见，虫体尾部向腹面弯曲超过180°单精巢前伸，交合刺玫瑰刺形，平滑弯曲，基顶和喙 不显著，背边长20.0μm～26.5μm；尾乳突3对，第1对位于泄殖腔附近，第2对位于尾中部，第3对位 于近尾端；尾端有2～4个尾尖突，形态多变（参见附录B、附录C、附录D）。 8.4与近似种的区别 菊花滑刃线虫雌虫与属内其他近似种（主要是尾尖突呈星形的种类）的比较参见附录E。 除菊花滑刃线虫外，滑刃属线虫中植物寄生线虫主要还有草莓滑刃线虫A.fragariae、水稻干尖线 虫A.besseyi和毁芽滑刃线虫A.blastophthorus。 菊花滑刃线虫和水稻干尖线虫的区别是前者排泄孔位于神经环后0.5～2倍体宽处，后阴子宫囊长 度超过肛阴距的二分之一，而后者排泄孔位于神经环对应处，后阴子宫囊小于肛阴距的三分之一。 菊花滑刃线虫与草莓滑刃线虫、毁芽滑刃线虫的主要区别是雌虫尾尖突：草莓滑刃线虫雌虫末端钝 尖，无尾尖突；毁芽滑刃线虫只有1个尾尖突。 9结果判断 以雌虫和雄虫的形态学特征为主要鉴定依据。菊花滑刃线虫的主要鉴定特征是：侧线4条；雌虫后 阴子宫囊长超过肛阴距的二分之一，常充满精子，尾长圆锥形，尾尖突复杂，为2～4个向后伸的尾尖突， 形成刷状结构。雄虫交合刺平滑腹弯，无基顶和喙。符合上述特征，可鉴定为菊花滑刃线虫，寄主与地 理分布等信息可供参考。 3