ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28092—2011 落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Botryosphaeria laricina (K. Sawada) Y. Z. Shong 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28092—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：吴翠萍、李彬、栗寒、高渊、陆军、吴晶、刘伟、高振兴、安榆林 1C I GB/T28092—2011 落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了落叶松枯梢病菌Botryosphaerialaricina（K.Sawada）Y.Z.Shong1987的检测和 鉴定方法。 本标准适用于对落叶松苗木、接穗以及带小枝梢的原木等样品携带落叶松枯梢病菌的检测和鉴定。 2落叶松枯梢病菌基本信息 中文名：落叶松枯梢病菌。 学名:Botryosphaeria laricina (K. Sawada)Y. Z. Shong 1987。 异名: Physalospora laricina K. Sawada,Guignardia laricina (K, Sawada) W. Yamamoto & K. Ito. 病害英文名：shootblightof larch，twigdieback of larch。 采用Ainsworth（1973）真菌分类系统，病原菌为子囊菌亚门Ascomycotina，腔菌纲Loculoascomy cetes，格孢腔菌目Pleosporales，葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae，葡萄座腔菌属Botryosphaeria。 无性阶段为半知菌亚门Deuteromycotina，腔孢纲Coelomycetes，球壳孢目Sphaeropsidales，球壳孢 科Sphaeropsidaceae，大茎点霉属Macrophoma。 落叶松枯梢病菌的其他信息参见附录A。 3方法原理 根据病原菌危害的症状特点（参见附录B）采集样品进行检测，观察病原菌产生的子实体的显微形 态特征，并结合病原菌的地理分布和寄主范围等有关信息进行结果判断 4仪器和用具 4.1仪器 体视显微镜、普通光学显微镜（具显微拍摄和测量功能）、光照培养箱、高压灭菌器、干热灭菌器、冰 箱等。ZIG 4.2用具 手持放大镜、试剂瓶、纱布、脱脂棉、镊子、剪刀、培养皿、修枝剪、吸管、酒精灯、打孔器（直径5mm）、 瓷盘、解剖刀、酒精灯、解剖针、载玻片、盖玻片、微量移液器、标本盒、海绵、胶带、标签等。 5试剂 石蜡，70%、95%酒精，二氧化硅干燥剂。 1 GB/T28092—2011 6检测 6.1样品采集 根据下列症状等进行样品采集：苗木、接穗上的新梢枯死，并且枯死的梢端呈弯曲状；在病组织上有 固着的白色滴状物树脂块；干枯的枝干部为紫褐色或灰褐色；在枯死的枝干、松针上有突出的枯梢病原 菌子实体。原木上如果带有的小枝梢，则应仔细观察小枝梢上有无子实体，若无，则可排除怀疑带有枯 梢病原菌。 6.2样品制备 6.2.1子实体的制片 用解剖针挑取样品上的子实体少许，置于载玻片上加盖玻片压碎或由发病部位直接切片制成水玻 片，在解剖镜或显微镜下观察子实体的形态并确认是否成熟。如果成熟，则观察典型形态特征并测量大 小；如果不成熟则需进一步培养。 6.2.2不成熟子实体的培养 对子实体不成熟的部位，先用无菌水浸泡2d～3d，然后浸泡在35℃和10℃的无菌水中进行交替 诱导产生成熟子实体并制片镜检。 7鉴定 7.1有性阶段子实体形态特征 露，大小为（170μm500μm）×（130μm～300μm）。子囊棍棒状，双壁，无色，顶端圆，下有短柄，平行 在，直径3um。子囊孢子8个，双行排列，椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为（22.5um～40μm）× (6.3μm15.5μm)。参见附录C。 7.2无性阶段子实体形态特征 分生孢子器群生于顶梢残留的叶背和顶梢小枝周围的表皮下，并使表皮突起，近球形或扁球形，黑 色，大小为（120μm~249μm）×（148μm～213μm）。分生孢子梗短，不分枝，圆柱形，（5μm～7μm） ×（2.5μm~3.2μm）。分生孢子椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为（24μm~30μm）×（6μm~9μm）。 常见12个油球。参见附录C。 性孢子器球形至扁球形，单个或几个丛生于病枝表皮下，大小为（115μm～214μm）×（109μm～ 190μm）。性孢子梗细长，无色，2个~3个分隔，大小为（12μm～16μm）×（3μm~5μm）。性孢子短 杆状或椭圆状，无色，大小为（3μm~6μm）×（1μm~2μm）参见附录C。 8结果判定 如有性阶段、无性阶段的形态特征符合第7章鉴定特征的描述，即可判定为落叶松枯梢病菌。 2 GB/T 28092—2011 9 标本和样品保存 发现落叶松枯梢病菌的样品，需制作成标本在室温条件下进行干燥保存，或将样品置于一20℃冷 冻保存，保存至少6个月，以备复检、谈判和仲裁。保存期满后进行灭活处理 3