ICS 65. 020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28080—2011 小麦印度腥黑穗病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Tilletia indica Mitra 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28080—2011 目 次 前言 范围 1 规范性引用文件 2 3小麦印度腥黑穗病菌基本信息 方法原理 4 检疫鉴定流程 5 6取样方法 6.1 未经加工小麦取样方法 6. 2 加工小麦取样方法 6.3 袋装面粉抽样比例 7主要仪器设备和试剂 7.1 主要仪器设备 7. 2 主要试剂 8检测与鉴定 8.1 样品前处理 8. 2 形态学鉴定 8.3 单个冬孢子直接分子检测 8.4 孢子培养物的分子检测 8. 5 序列测定与比对 9结果判断与表述 形态学鉴定结果判断和表述 9. 2 单个孢子直接分子检测结果判断和表述 9.3 孢子培养物分子检测结果判断和表述 9.4序列测定与比对 10 样品和原始数据保存 10.1 样品保存 10.2 原始数据保存 附录A（资料性附录）小麦印度腥黑穗病菌其他信息 附录B（规范性附录） 形态学鉴定 附录C（资料性附录） 小麦印度腥黑穗病菌与近似种的孢子显微形态图和扫描形态图 10 附录D（规范性附录）单个冬孢子直接分子检测 12 附录E（规范性附录） 孢子培养物常规PCR检测 14 附录F（规范性附录） 孢子培养物实时荧光PCR检测 16 附录G（规范性附录）序列测定与比对 18 GB/T28080—2011 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：章桂明、程颖慧、王颖、陆清、凌杏元、龙海、陈枝楠、向才玉、杨伟东、缪建。 一 GB/T28080—2011 小麦印度腥黑穗病菌检疫鉴定方法 1范围 了小麦印度腥黑穗病菌检疫鉴定流程，明确了取样和样品保存方法。 本标准适用于小麦及其加工产品传带的小麦印度腥黑穗病菌的检测。 本标准也适用于除小麦以外的该病菌其他寄主传带小麦印度腥黑穗病菌的检测。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3小麦印度握黑穗病菌基本信息 SAG 中文名：小麦印度腥黑穗病菌。 学名：Tilletia indica Mitra。 异名：Neovossia indica（Mitra)Mundkur。 病害英文名：karnalbuntofwheat(简称KB)，partialbuntofwheat。 属真菌界Fungi、担子菌门Basidiomycota、黑粉菌纲Ustomycetes、黑粉菌目Ustilaginales、腥黑粉 菌科Tilletiaceae、腥黑粉菌属Tilletia。 小麦印度腥黑穗病菌主要通过发病种子和附着于健康种子表面的冬孢子进行远距离传播，也可随 土壤及其他农用工具进行传播。 小麦印度腥黑穗病菌的其他信息参见附录A。 4方法原理 根据小麦印度腥黑穗病菌的生物学和形态学特征以及分子生物学特征，应用相关仪器，包括显微镜 和PCR仪等对小麦印度腥黑穗病菌进行鉴定。 5检疫鉴定流程 检疫鉴定流程见图1。 1 GB/T28080—2011 样品 洗涤 镜检 未发现疑似KB孢子 发现凝似KB孢子 查找菌楼 单个冬孢子分子检测 冬孢子萌发 发现疑似KB菌瘦 未发现能似KB菌楼 (附录D) 判定为不带KB孢子 孢子培养物分子检测 形态学鉴定 进行形念学鉴定 （附录E、附录F、附录G) （附录A、附录B、附录C) 或分子检测 实时荧光PCR检测 常规PCR检测 序列测定与比对 结果判定 结果判定 菌婆或洗涤检验 菌瘦或洗涤检验 结果呈阴性 孢子平均值在 菌瘦或洗涤检验 结果呈阳性 孢子平均值大于 孢子平均值小于 判定为KB 判定为非KB 25 μm~35 μm 35μm为KB 25μm为非KB 间做分子检测 图1小麦印度腥黑穗病菌检疫鉴定流程图