ICS 71. 100.70 Y 42 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 265172011 化妆品中二十四种防腐剂的测定 高效液相色谱法 Determination of 24 preservatives in cosmetics- High performance liquid chromatography method 2011-05-12发布 2011-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 26517—2011 前言 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所、上海市 质量监督检验技术研究院 本标准主要起草人：武婷、王超、马强、肖海清、张庆、沈敏、康薇 1 GB/T 26517—2011 化妆品中二十四种防腐剂的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中二十四种防腐剂的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、乳液、化妆水等皮肤护理类化妆品中二十四种防腐剂的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 以甲醇为溶剂，超声提取、离心，0.45um的有机滤膜过滤，溶液注人配有二极管阵列检测器 (DAD)的液相色谱仪检测，外标法定量。 4试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2水杨酸，纯度不小于99.0%；4-羟基苯甲酸乙酯，纯度不小于99.0%；4-羟基苯甲酸丙酯，纯度不 小于99.0%；4-羟基苯甲酸丁酯，纯度不小于99.0%；4-羟基苯甲酸甲酯，纯度不小于99.0%；甲基氯异 噻唑嘛酮，纯度不小于99.0%；甲基异唑嘛酮，纯度不小于99.0%；苯甲醇，纯度不小于99.0%；苯氧 乙醇，纯度不小于99.0%；p-氯-m-甲苯酚，纯度不小于98.0%；三氯生，纯度不小于97.0%；三氯卡班， 纯度不小于99.0%苯甲酸甲酯，纯度不小于99.0%；苯甲酸乙酯，纯度不小于99.0%；苯甲酸苯酯，纯 度不小于99.0%；2-漠-2-硝基丙烷-1，3二醇，纯度不小于98.0%；2，4-二氯-3，5-二甲酚，纯度不小于 99.0%；4-羟基苯甲酸异丙酯，纯度不小于99.0%；0-苯基苯酚，纯度不小于98.0%；氯二甲酚，纯度不 小于98.0%；4-羟基苯甲酸异丁酯，纯度不小于99.0%；苄氯酚，纯度不小于99.0%；苯甲酸，纯度不小 于99.0%；山梨酸，纯度不小于99.0%。 注：2，4-二氯-3,5-二甲酚未列入卫监督发[2007]1号《化妆品卫生规范》的表4"化妆品组分中限用防腐剂”中。 4.3防腐剂标准储备液：准确称取各防腐剂（4.2)0.5g，精确到0.0001g，分别置于50mL烧杯中，加 适量甲醇溶解，移入100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，即得5000mg/L的各防腐剂标准储 备液。 4.4防腐剂混合标准储备液：分别移取2mL的标准储备液（4.3）至100mL容量瓶中，用甲醇定容至 刻度，即得各防腐剂浓度均为100mg/L混合标准储备液。冰箱冷藏保存，可使用三个月。 4.5防腐剂标准工作溶液：用甲醇将混合标准储备液（4.4）分别配成一系列浓度为0.5ug/mL、 1uμg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准工作溶液，在冰箱冷藏保存，可使用一周。 4.60.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH3.80）：称取磷酸二氢钠（NaH,PO4：2H,O)3.9g，精确至 0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解，移人1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得 1 GB/T 26517—2011 0.025mol/L的磷酸二氢钠溶液。用10%磷酸溶液调节pH值至3.80。 5仪器 5.1液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。 5.2微量进样器，10μL。 5.3超声波清洗器。 5.4离心机，大于5000r/min。 5.5溶剂过滤器和0.45um有机过滤膜。 5.6具塞比色管，10mL。 6测定步骤 6.1样品处理 称取化妆品试样约0.2g（精确到0.001g）于10mL具塞比色管中，加人8mL甲醇，在超声波清洗 器中超声振荡30min，冷却后，用甲醇稀释至刻度，混匀。部分溶液放入离心管中，在离心机上于 6.2测定 6.2.1色谱条件 6.2.1.1色谱柱：KromasilCis柱[250mmX4.6mmi.d.),5μm]。 6.2.1.2流动相：A：甲醇，B：0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH3.80)（4.6），梯度洗脱条件见表1。 表1方法的梯度洗脱条件 时间/min A/% B/ % 0 45 55 10 45 55 20 70 30 30 85 15 37 85 15 6.2.1.3流速：1.0mL/min。 6.2.1.5柱温：25℃。 6.2.1.6进样量：10μL。 注：方法中所使用的色谱柱仅供参考，同等性能的色谱柱均可使用。流动相比例、流速等色谱条件随仪器而异，操 作者可根据试验选择最佳操作条件使目标峰与干扰峰得到完全分离。 6.2.2标准工作曲线绘制 分别移取0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的一系列浓度的标准工作溶液， 按色谱条件（6.2.1)进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工 作曲线。二十四种防腐剂的标准液相色谱图参见附录A的图A.1。 6.2.3试样测定 用微量进样器准确吸取试样溶液（6.1）注入液相色谱仪中，按色谱条件（6.2.1）进行测定，记录色谱 峰的保留时间和峰面积，可从标准曲线上由色谱峰的峰面积求出相应的防腐剂浓度。试样溶液中的被 动相稀释后进行测定。 2 GB/T 26517—2011 6.2.4定性确证 液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出被测防腐剂的色谱峰的保留时间与标 准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一 致，则可初步确认样品中存在被测防腐剂。必要时，需用其他方法进行确认试验。 6.3空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 结果计算 7 结果按式（1）计算（计算结果应扣除空白值）： c, : V. X, = X100% .(1) 1000m 式中： X, 样品中某一防腐剂的质量分数，%； 标准曲线查得某一防腐剂的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Vi- 样品稀释后的总体积，单位为升（L）； 样品质量，单位为克（g）。 8 方法检出限与定量限 结果参见附录B的表B.1。 9 回收率与精密度 在添加浓度0.0000625%～0.02875%范围内，回收率在85%～110%之间，相对标准偏差小 于10%。 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 3