ICS 11. 020 05 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T26347—2010 蚊虫抗药性检测方法 生物测定法 Test methods of mosquito resistance to insecticides-Bioassay methods 2011-01-14发布 2011-05-01实施 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 26347—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 预防控制中心。 本标准主要起草人：赵彤言、汪中明、董言德、曾晓、高希武、宋锋林、佟颖、韩玉华。 I GB/T26347—2010 蚊虫抗药性检测方法 生物测定法 1范围 本标准规定了测定蚊虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法 和敏感基线法。 本标准适用于淡色库蚊（Culerpipienspallens）、致倦库蚊（Cr：pipiensquinquefasciatus）、白纹伊 蚊（Aedesalbopictus）、中华按蚊（Anophelessinensis）等蚊虫抗药性的生物测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 敏感基线 susceptible baseline data 所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线（LD-p）。 2.2 诊断剂量 diagnostic dose 由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值（LC99或 LCg9.，），一般以2倍LCgg或LCg9.9值区别抗性和敏感种群。 2.3 F1 代 F1generation 采集的样本繁殖后的第一代蚊虫。 3试虫 样本多点采集。 幼虫浸渍法采用F1代四龄幼虫。 成蚊接触筒法采用野外采集的幼虫或羽化后，3d～5d未吸血雌蚊。 4试剂 丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药等。 5仪器 蚊笼、滤纸、接触筒（参见附录A）、吸蚊器。 6测试条件 温度：25℃±1℃，光周期：14L：10D，相对湿度：60%~80%。 1 GB/T26347—2010 7敏感基线法 7.1原理 依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程，以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线 作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比，来确定待测种群的抗性水 平。具体是比较两条毒力回归线的6值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。 7.2操作步骤 7.2.1幼虫浸渍法 每只烧杯量人149mL脱氯自来水。将待测药剂用丙酮等比或等差稀释至一个系列浓度，通过预 实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时幼虫死亡率小于20%，最高浓度时大于80%，然后吸取 1mL已配制好的药液滴人水面上，用玻璃棒搅勾，然后把另一杯中预先挑选的幼虫（30只）连同50mL 水全部注入烧杯内，合计200mL水溶液，整个实验保持在25℃士1℃，相对湿度60%～80%的温室 内，24h后检查死亡数。每个浓度重复3次。以丙酮作为对照。根据每一浓度对应的死亡率，将剂量 取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归，求出LC50值。 7.2.2成蚊接触法 用白油与乙醚按1：2的配比混合物将待测药剂等比或等差稀释至一个系列浓度，通过预实验确定 药剂的浓度系列范围，最低浓度时幼虫死亡率小于20%，最高浓度时大于80%，取2mL每个浓度的药 液均匀涂抹于15.7cm×12.5cm大小的1mm厚的滤纸上，待溶剂挥发大约5h后，衬垫于圆筒内壁， 做为接触筒，用吸蚊管吸取30只羽化后3d～5d未吸血雌蚊，放入接触筒内，关闭隔板，开始计算接触 时间，接触1h后抽开隔板，将蚊虫吹人恢复筒内，取下恢复筒，直立放置，用一浸有8%葡萄糖水的棉花 作为对照。根据每一浓度对应的死亡率，将剂量取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归，求出 LC5o值。 7.3死亡判断 7.3.1幼虫浸渍法 轻轻触动幼虫，以不能逃避刺激视为死亡。 7.3.2成蚊接触法 试虫完全不动视为死亡。 7.4结果表述 结果用抗性倍数表述，抗性倍数=待测种群LC50值/敏感种群LC5值 7.5判别标准 敏感品系和所测样本之间95%置信限不重叠，且抗性倍数5倍为抗性种群。 2 GB/T 26347—2010 8诊断剂量法 8.1原理 依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂 量。一般用2倍敏感品系的LCg值作为诊断剂量。根据待检测蚊虫种群在诊断剂量下的死亡率作为 抗性判定标准。 8.2操作步骤 8.2.1幼虫浸渍法 取1mL已配制好的药液加人盛有149mL脱氯自来水的烧杯中，用玻璃棒搅勾。把另一杯中预先 挑选好的30条幼虫连同50mL水，全部注入上述烧杯内，合计200mL溶液，使药剂的终浓度达到诊 断剂量（常用杀虫药剂对淡色库蚊幼虫的诊断剂量参见表B.1）。以1mL相应溶剂处理为对照组。 24h后记录死亡数。实验重复3次。 8.2.2成蚊接触法 药剂用白油与乙醚混合物（配比1：2）稀释至诊断剂量浓度（常用杀虫剂对成蚊的诊断剂量参见 后，将滤纸衬垫于接触筒内壁，用吸蚊管吸取30只羽化后3d～5d未吸血雌蚊，放入接触筒内，关闭隔板 开始计算接触时间，接触1h后抽开隔板，将蚊虫吹入恢复筒内，取下恢复筒，直立放置，用浸有8%葡萄糖 水的棉花团置于纱网上，24h后记录试虫死亡数。实验重复3次，以白油与乙醚的混合物作为对照。 8.3结果表述 结果用死亡率表述，见公式（1）。 M= .(1) N 式中：9 M死亡率； Nm—死亡虫数； N—试虫总数。 对照死亡率小于5%无需校正；对照死亡率在5%～20%之间，用Abbott公式进行校正；对照死亡 率大于20%为无效测定。 依据Abbott公式校正死亡率，见公式（2）。 Mm= .(2) 1-M. 式中： M 校正死亡率； M,——处理组死亡率； M。—对照组死亡率。 8.4判别标准 在诊断剂量下蚊虫的死亡率在98%100%表明其为敏感种群：死亡率在80%～97%表明其为可 能抗性种群；死亡率<80%表明其为抗性种群。 3