ICS 71.100.40 Y43 中华人民共和国国家标准 GB/T 32121—2015 牙膏中4-氨甲基环已甲酸（凝血酸）的 测定 高效液相色谱串联质谱法 Determination of 4-(aminomethyl) cyclohexanecarboxylic acid (tranexamic acid)in toothpaste—HPLC-MS/MS 2015-10-09发布 2016-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 32121—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意，本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国轻工业联合会提出 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所（国家日化产品质量监督检验中心）、大连标准检测技 术研究中心 本标准主要起草人：毛希琴、郑顺利、胡侠、任国杰、李春玲、董广斌。 5C I GB/T 32121—2015 牙膏中4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）的 测定 高效液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了牙膏中4-氨甲基环已甲酸（凝血酸）的测定方法高效液相色谱串联质谱法 本标准适用于牙膏中4-氨甲基环已甲酸（凝血酸）的测定。 本标准方法检出限：0.3μg/g；定量下限：1.0μg/g。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第1部分：总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法要点 牙膏先用水溶液分散，然后加人二氯甲烷，涡旋离心去除固形物及大部分的表面活性剂后，上清液 与3%甲酸水溶液混合后酸性条件下过强阳离子固相萃取小柱，1.5%甲酸水溶液淋洗柱床，20%甲醇水 溶液（含2%氨水）洗脱目标物，洗脱液经3%甲酸水溶液中和并定容后，由液相色谱分离，串联质谱法测 定，标准曲线外标法定量。因自标物在低浓度下不稳定，提取及固相萃取过程均需以乙二胺四乙酸 （EDTA）二钠作为稳定剂进行保护。 4标准物质与试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的实验室用一级水。 4.1标准物质 表1标准物质信息 化合物名称 4-氨甲基环己甲酸 英文名称 4-(aminomethyl)cyclohexanecarboxylic acid,tranexamic acid 别名 氨甲环酸，凝血酸，止血环酸 CAS号 1197-18-8 分子式 C,Hi,NO2 1 GB/T32121—2015 表1 (续) 化合物名称 4-氨甲基环已甲酸 NH2 分子结构式 11O. 0 分子量 157.21 纯度 ≥99.0% 4.2 甲酸：色谱纯（配制色谱流动相使用） 4.3 甲醇：色谱纯（配制色谱流动相使用） 4.4 甲醇 4.5 甲酸 4.6 二氯甲烷 4.7 氨水（25%） 4.8 乙二胺四乙酸（EDTA)二钠 4.9 1.5%甲酸水溶液 7.5mL甲酸（4.4）+0.0037gEDTA二钠（4.8），加水溶解并定容至500mL。 4.103%甲酸水溶液 15mL甲酸（4.4)+0.0037gEDTA二钠（4.8），加水溶解并定容至500mL。 4.110.02mmol/LEDTA二钠水溶液 称取0.0037gEDTA二钠（4.8），加水溶解并定容至500mL。 4.1220%甲醇水溶液（含2%氨水） 10mL氨水（4.7)+100mL甲醇（4.4）十0.0037gEDTA二钠（4.8），加水溶解并定容至500mL。 4.13SCX（强阳离子）固相萃取小柱：200mg，3mL 4.14标准购备液（1mg/mL） 准确称取4-氨甲基环已甲酸标准物质各10.0mg，用0.02mmol/LEDTA二钠水溶液（4.11)溶解 定容至10.0mlL，配置浓度为1mg/ml的标准储备溶液，于冰箱冷藏保存，保存期1个月。 4.15标准工作溶液 200μg/L系列浓度的标准工作溶液。 N GB/T32121—2015 5仪器 5.1 高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪（ESI源） 5.2 分析天平：感量0.1mg，0.01mg 5.3 旋涡混合器 5.4 超声波清洗器 5.5 离心机：转速不低于5000r/min，容量10mL 5.6 移液枪或移液器 6试样制备 6.1提取 牙膏样品挤出约2cm，弃去，称取0.2g（精确至0.1mg）牙膏样品于10mL刻度试管中，加入4mL 2min，5000r/min离心10min，准确移取1mL上清液于5mL离心管中，向离心管中加人1mL3% 甲酸水溶液（4.10），超声混匀后（勿振荡，避免溶液产生泡沫）待进一步净化 6.2净化 将待净化溶液小心加入预先处理好的SCX固相萃取小柱，用1mL1.5%甲酸水溶液（4.9）润洗离 心管（勿剧烈震荡或涡旋，可适当超声，否则会因溶液泡沫而无法完全转移），润洗溶液也加人固相萃取 小柱，待所有溶液通过固相萃取小柱后，用3mL1.5%甲酸水溶液（4.9）淋洗柱床，弃去所有流出溶液， 然后在柱出口处放置5mL具塞刻度试管。继续向柱床加入3mL20%甲醇水溶液（含2%氨水）（4.12） 洗脱目标物，收集所有洗脱溶液，用3%甲酸水溶液（4.10）中和并定容至4mL，涡旋混匀后待测。 注：若待测液中目标物浓度高于500pμg/mL，需稀释至适当浓度后再进行测试。 7测定 7.11 色谱条件 色谱条件为： a） 色谱柱：SB-AQ色谱柱2.7μm，3.0mmX100mm或相当者； b) 流动相：15%甲醇水溶液（含0.1%甲酸）； c) 流速:0.3mL/min; d) 柱温：25℃； e) 进样量：2μL。 7.2 质谱条件 质谱条件为： a） 电离方式：电喷雾电离，正离子模式，ESI（十）； b）雾化气：氮气，241.3kPa(35psi)； 3 SC