ICS 71.100.40 Y 43 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 32118—2015 牙膏中甲醛含量的测定 高效液相色谱法 Determinateion of formaldehyde in toothpaste- High performance liquid chromatography 2015-10-09发布 2016-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32118—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1)归口。 本标准起草单位：上海美加净日化有限公司。 本标准主要起草人：陈健芬、施裔磊。 1 GB/T32118—2015 牙膏中甲醛含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了牙膏中甲醛含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于牙膏中添加有甲醛的含量测定，不适用于含有其他甲醛释放剂的牙膏产品。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 将牙膏用水溶解，离心和分离后，上清液以2，4-二硝基苯肼为衍生化试剂，在加热的条件下反应生 样品中甲醛的含量。 甲醛与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯的反应式如图1所示。 HN-N HN- N-CH2 NO2 0. 09 NO2 1 h NO2 NO2 2，4-二硝基苯肼 2，4-硝基苯腺 图1 甲醛衍生化反应式 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲醛标准溶液（10.0mg/mL）：安培瓶封装，置于10℃以上保存，使用时与室温平衡，摇动均匀，打 开后推荐一次性使用，或者将标准溶液转移至棕色瓶密封，于10℃以上保存。 4.3冰乙酸：分析纯。 4.4 乙酸钠：分析纯。 4.5 2.4-二硝基苯肼：纯度≥99%。 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.0）：称取2.64g乙酸钠，以适量水溶解，加人1.0mL冰乙酸，用水定 1 GB/T32118—2015 容至500mL。 4.72，4-二硝基苯肼溶液（0.6g/L）：称取2,4-二硝基苯肼300mg，用乙腈溶解并定容至500mL。 4.8甲醛标准储备液：精密移取甲醛标准溶液（4.2)0.5mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制 得甲醛浓度为0.05mg/mL的标准储备液。 4.9甲醛标准工作溶液：分别移取0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL，5mL的甲醛标准储备液（4.8）于一组 10mL的容量瓶中，用水定容至刻度，配制浓度为2.5μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，15μg/mL，20μg/mL， 25μg/mL的标准工作液。 4.10微孔滤膜：0.45μm，有机相。 5仪器与设备 5.17 高效液相色谱仪（HPLC）：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2 分析天平：感量0.0001g。 5.3 磁力搅拌器。 5.47 离心机。 恒温水浴锅。 5.5 6分析步骤 6.1 样品制备 精密称取牙膏样品约5g（精确至0.0001g），用水定容至100mL容量瓶中，搅拌至均离心分离 （4000r/min）10min，准确移取2mL上清液于10mL比色管中，加人3mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液 (pH一5.0)后，用0.6g/L的2，4-二硝基苯耕溶液定容，盖上塞后混勾。将比色管移人60℃水浴锅中进 行衍生，反应时间为1h。反应完成后，冷却至室温，经0.45μm有机系微孔滤膜过滤后，供HPLC进样 测定。 6.2甲醛衍生物标准溶液的制备 分别移取4.9中各浓度的系列标准工作溶液2mL于一组10mL比色管中，加人3mL乙酸-乙酸 钠缓冲溶液（pH=5.0）后，用0.6g/L的2，4-二硝基苯耕溶液定容，盖上塞后混匀。将比色管移入60℃ 水浴锅中进行衍生反应，时间为1h。反应完成后，冷却至室温，经0.45μm有机系微孔滤膜过滤后，供 HPLC进样测定。 注：标准溶液、空白溶液与样品溶液需同时进行衍生。 6.3测定 6.3.1色谱分离条件 a) 液相色谱柱：DionexAcclaimTM120型Cis色谱柱（3μm，3X150mm），或相当的色谱柱； b) 流动相：乙：水60：40（体积比）； 流速：1.0mL/min； c) 柱温：30℃； e) 检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器； f) 检测波长：360nm； g) 进样量：20μL。 2 GB/T32118—2015 6.3.2标准工作曲线的绘制 将甲醛系列标准工作液的衍生液（6.2）按浓度从低到高依次导人液相色谱仪进行测定，以甲醛衍生 甲醛标准样品的二极管阵列检测器液相色谱图参见附录A中的图A.1。 6.3.3定量分析 本方法采用标准工作曲线法测定甲醛的含量。样品溶液和试剂空白溶液导人液相色谱仪进行测 定。以样品溶液中甲醛衍生物的峰面积与标准曲线比较定量。待测物的响应值均应在线性范围内。 6.4空白实验 除不称取样品外，均按上述样品处理步骤和测定条件进行。 6.5平行实验 按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。 7结果计算 样品中甲醛的含量由色谱数据处理软件或按式（1)计算，计算结果需扣除空白值。测定结果用平行 测定结果的算术平均值表示。 mX1000 式中： X 样品中甲醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 样品中甲醛衍生物面积对应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； k 稀释倍数； m 样品的质量，单位为克（g）。 检出限 8 本方法牙膏中甲醛的检出限为20mg/kg。 9 回收率 本方法的回收率在95%～110%，相对标准偏差小于5% SAG