ICS 11. 220 B 50 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 27623.2—2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第2部分：人工感染防治试验 Pharmacodynamic test technical specification for aquaculture antimicrobial agent- Part 2:Prevention and cure test with artificial infection 2011-12-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27623.2—2011 前言 GB/T27623《渔用抗菌药物药效试验技术规范》分为两个部分： 第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验； 第2部分：人工感染防治试验。 本部分为GB/T27623的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所。 本部分主要起草人：刘淇、李健、王群、戴芳钰。 I GB/T27623.2—2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第2部分：人工感染防治试验 1范围 GB/T27623的本部分规定了渔用抗菌药物用于水生动物人工感染防治试验的实验材料、环境条 件、操作步骤和试验结果的处理与报告。 本部分适用于人工感染水生动物细菌性疾病的防治试验，采用自然发病水生动物的防治试验可参 照执行。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY5051无公害食品淡水养殖用水水质 NY5052无公害食品海水养殖用水水质 3实验材料 3.1实验用水生动物 用于人工感染防治试验的水生动物应健康、无外伤、摄食正常、个体大小基本一致，并且来自同一养 殖环境。试验前应在试验环境条件下暂养7d～10d，以适应环境， 3.2感染用菌株 3.2.1菌株来源 感染用菌株应是来自国家级微生物菌种保藏中心的标准致病菌株、通过认证的水产病原保藏中心 提供的分类地位明确的致病菌株或临床分离的致病菌株，使用临床分离的致病菌株时应至少鉴定至属。 3.2.2菌株毒力复壮 菌株毒力达不到要求时应进行毒力复壮。方法是将菌株接种到适宜的培养基上孵育，取适量菌液 采用注射等方式对实验水生动物进行感染，待感染对象出现明显症状时，取其病变部位分离病原菌并进 行纯化、鉴定和保种。 4试验环境条件 试验应在能够保持养殖水环境基本稳定、不受外界环境突然变化或污染影响的相对独立系统的容 器中进行，试验水体、生物密度和水温等应不影响实验对象的正常生理活动。实验动物养殖用水应符合 NY5051或NY5052的要求，试验期间应适量投喂饵料。 1 GB/T27623.2—2011 5操作步骤 5.1试验分组 5.1.1试验分组要求 5.1.1.1空白对照组：不感染、不给药。 5.1.1.2阴性对照组：感染后不给药。 5.1.1.3药物试验组：设高、中、低3个剂量组，其中中剂量为推荐使用剂量 5.1.1.4对照药物组：使用与试验药物同类的药效明确的已知药物，按常规剂量给药，与药物试验组同 时进行。 5.1.2实验水生动物数量 每个试验组实验水生动物数量应不低于50尾（只），设不少于3个平行重复。 5.2人工感染方法 5.2.1感染途径 将感染用菌株在液体培养基增菌，离心收集菌体，用无菌生理盐水悬浮。采用浸浴（必要时对实验 水生动物进行创伤）、注射（腹腔或肌肉）或口服等方式进行感染。 5.2.2感染强度 根据选定的感染途径，采用等对数间距设计约5个感染剂量进行感染预试验，观察记录10d内实 验对象的死亡率，求出实验对象50%死亡率的感染剂量（LD5）。在同样的试验环境条件下采用 1XLD50～2XLD5o的感染剂量进行感染。 感染强度应符合下列要求： a）感染24h内（注射感染6h内）阴性对照组实验对象的死亡数不超过阴性对照组总死亡数 的50%。 b）感染10d时阴性对照组实验对象的累计死亡率不低于50%。 5.3给药方法 5.3.1注射感染的给药方法 以注射途径感染的，应在感染6h内进行口服、药浴或注射给药，但注射给药不得与注射感染部位 相同。 5.3.2浸浴、口服感染的给药方法 以浸浴或口服途径感染的，应在感染12h内进行口服、药浴或注射给药。 5.4给药次数 根据试验药物的性质，磺胺类药物24h给药1次或2次，疗程3d～5d；其他抗菌药24h给药1次 或2次，疗程2d～3d。 5.5试验观察时间 试验观察时间以10d左右为宜。 2 GB/T27623.2—2011 5.6试验结果记录 试验中观察记录各组的死亡数，其中药物试验组给药前各组（包括阴性对照组）死亡的实验水生动 物不计算在内。 6 试验结果处理 6.1 试验结果计算 试验结果以保护率来表示，按式（1）计算。 RPS=(1-y/)×100% ..(1) 式中： 5ZIC RPS 保护率，%； ——药物试验组实验动物死亡率； y 一阴性对照组实验动物死亡率。 6.2 试验结果的生物统计 采用卡方（x）检验统计各组间保护率的差异显著性。 6.3质量控制 6.3.1空白对照组实验水生动物死亡率超过5%时，试验结果应舍弃。检查实验对象的健康状况和养 殖环境条件，重新进行试验。 6.3.2感染强度不符合5.2.2.2条规定时，应调整感染剂量重新进行试验。 6.3.3试验药物高剂量组保护率低于中剂量组或低剂量组，以及试验药物中剂量组保护率低于低剂量 组时，应重新设计药物剂量进行试验。 试验结果的报告 试验结果的报告应至少包括以下内容： 实验动物的名称、规格、来源； a) 试验时的水温、溶解氧、密度等养殖环境条件； c) 感染用菌株的名称、来源、感染途径、感染剂量； d) 试验药物和对照药物的名称、含量、给药方式、给药次数、疗程； e) f) 阴性对照组和空白对照组的死亡率。