ICS 71. 100. 70 Y42 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 24800.8—2009 化妆品中甲氨嘌呤的测定 高效液相色谱法 Determination of methotrexate in cosmetics by high performance liquid chromatography method 2009-11-30发布 2010-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T24800.8—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。 本标准主要起草人：王星、武婷、张庆、肖海清、席广成、马强、沈敏、康薇。 1 GB/T24800.8—2009 引言 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，则化妆品成品应符合《化妆品 卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害 目前我国尚未规定该物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定该物质提供检测方法。 GB/T24800.8—2009 化妆品中甲氨嘌岭的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中甲氨嘌呤的测定方法 本标准适用于化妆品中甲氨嘌岭的测定。 本标准对于甲氨嘌呤的检出限为1mg/kg，定量限为2.5mg/kg。 2原理 以流动相-甲醇与0.025mol/L磷酸二氢钠（pH5.0）（30十70，v/v）为溶剂，超声提取、离心 0.45um的有机滤膜过滤，溶液注入配有二极管阵列检测器（DAD)的液相色谱仪检测，外标法定量 3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯。水为超纯水。 3.1甲醇：色谱纯。 3.2四氢呋喃：色谱纯 3.3甲氨岭，纯度不小于97%，CAS编号为：59-05-2 3.4甲氨呤标准储备液：准确称取甲氨嘌呤0.05g，精确到0.0001g，于50mL烧杯中，加1mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解后移人100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，即得甲氨嘌呤溶液浓度 为500mg/L的标准储备液。储备液在冰箱冷藏保存，可使用两个月。 3.5标准工作溶液：用水将上述标准储备液（3.4）分别配成一系列浓度0.05mg/L、0.1mg/L、 1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的标准工作溶液，冰箱冷藏保存，可使用一周。 3.60.1mol/L的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.4g，精确到0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解后 转移至100mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.1mol/L的氢氧化钠溶液。 3.70.025mol/L的磷酸二氢钠（pH5.0）：称取磷酸二氢钠（NaH,PO·2HzO）3.9g，精确到 0.001g，于100mL烧杯中，加水溶解转移至1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.025mol/L 的磷酸二氢钠溶液，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液（3.6)调节pH至5.0。 4仪器 4.1液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。 4.2 微量进样器，10μL。 4.3 超声波清洗器。 4.4离心机，大于5000r/min。 4.5溶剂过滤器和0.45μm有机过滤膜。 4. 6 具塞比色管，10ml。 5测定步骤 5.1样品处理 称取化妆品试样约0.2g，精确到0.001g，于10mL具塞比色管中，加入8mL流动相（甲醇： 1 SAG GB/T24800.8—2009 0.025mol/L磷酸二氢钠（pH5.0）=30+70，v/v），在超声波清洗器中超声振荡20min，冷却后用流动 相稀释至刻度，混匀。取部分溶液放入离心管中，在离心机上于5000r/min离心20min，离心后的上 清液经0.45μm有机滤膜过滤，滤液待测定用。 对于口红等含蜡质较多的化妆品样品，提取溶剂为四氢呋喃-磷酸二氢钠（0.025mol/L，pH5.0） (1十1，v/v），其他步骤同上。 5.2测定 5.2.1色谱条件 5.2.1.1色谱柱：Cs柱（250mm×4.6mm内径，5μm），或相当者； 5.2.1.2流动相：甲醇：0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH5.0）,30+70（v/v）； 5.2.1.3流速:1.0mL/min; 5.2.1.4柱温:25℃； 5.2.1.5检测波长：302nm； 5.2.1.6进样量：10μL。 5.2.2标准工作曲线绘制 分别移取10uL浓度为一系列0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、 20mg/L的标准工作溶液，按色谱条件（5.2.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓 度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。 标准物质色谱图参见附录A的图A.1。 5.2.3试样测定 用微量注射器准确吸取10μL试样溶液（5.1)注入液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1)进行测定，记录 色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的甲氨嘌岭的浓度。试样溶 液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流 动相稀释后进行测定。 5.2.4定性确认 液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出甲氨嘌呤的色谱峰的保留时间与标准 品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一 致，则可初步确认样品中存在甲氨嘌呤。必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验。 5.3平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定 5.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 6结果计算 结果按式（1)计算（计算结果应扣除空白值）： X, = c.V .(1) m 式中： X，一样品中甲氨嘌岭的质量浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）； Ci—标准曲线查得甲氨嘌岭的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V一样品稀释后的总体积，单位为毫升（mL）； m—样品质量，单位为克（g）。 7方法检出限与定量限 甲氨嘌呤的检出限为1mg/kg，定量限为2.5mg/kg 2