ICS 65.020 B 16 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 24828—2009 穿刺根腐线虫检疫鉴定方法 Methods for quarantine and identification of Pratylenchus penetrans 2009-12-15发布 2010-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T24828—2009 前言 本标准的附录A、附录B均为规范性附录。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中国检验检疫科学院。 本标准主要起草人：戚龙君、葛建军、宋绍祎、孙红、郑建中。 GB/T24828—2009 穿刺根腐线虫检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了对穿刺根腐线虫检疫和鉴定方法 本标准适用于花卉、观赏植物、蔬菜、烟草、果树、豆科、禾本科等多种植物根部和土壤及栽培介质中 的穿刺根腐线虫。 2鉴定依据 穿刺根腐线虫英文名：Root-LesionNematode 学名：Pratylenchuspenetrans（Cobb,1917）Filipjev&.Schuurmans Stekhoven,1941 异名：Tylenchus penetransCobb,1917 Anguillulina（(Pratylenchus)penetrans(Cobb)Goodey,1932 Tylenchus gulosus Kuhn,1890 Pratylenchus gulosus (Kuhn) Filipjev &. Schuurmans Stekhoven,1941 分类地位：线虫门（Nemata）、侧尾腺纲（Secernentea）垫刃目（Tylenchida）、根腐线虫科（Praty lenchidae）、根腐线虫属（Pratylenchus） 穿刺根腐线虫是一种根部迁移性内寄生线虫，被侵染的植株呈现如下特征： a）地上部分表现为生长不良，发生矮化、褪绿，过早凋萎甚至死亡，产量减少； b）地下部分引起根部变褐色、坏死，根茎和块茎往往也会遭受侵害； 幼虫和成虫都可以侵人寄主根部组织，在病痕区和健康组织的交界处可见各个发育阶段的 线虫。 该线虫危害350多种植物，主要分布在温带地区。它的形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。 3仪器、用具 3.1 生物显微镜（40×以上）。 3.2 生物体视显微镜（10×以上，具透射光源）。 3. 3 电热恒温箱。 3.4 载玻片和凹玻片。 3. 5 盖玻片。 3. 6 分样筛（100目、500目）。 3.7 烧杯(500mL、1000mL)。 3.8 漏斗。 3. 9 漏斗架。 3.10 乳胶管或硅胶管。 3.11止水夹。 3.12小镊子。 3.13剪刀。 3.14挑针。 3.15浅盘。 3.16线虫滤纸或卫生纸。 1 GB/T 24828—2009 3. 17 酒精灯。 3.18 钟面皿或培养皿。 3.19加热板。 3.20干燥器。 3.21试管。 4药品 4.1中性树胶。 4.24%甲醛。 4.3指甲油。 4.4乳酚油（苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成）。 4.5石蜡。 5现场检疫 5.1抽样 5.1.1抽样方法 棋盘式、五点式或随机抽样。 5.1.2抽样数量 按总件数的5%~20%抽样，最低抽检10件且不少于500株（个）。采集样品数量见表1。 表1采集样品数量表 总株（个）数，N 采集样品株（个)数 N<50 5 51≤N≤200 10 201≤N≤1 000 15 1001≤N≤5000 20 5001≤10000 25 N>10000 在30的基础上，每增加5000株（个）增取5株（个） 5.2外观症状的检查 5.2.1对花卉、观赏植物、烟草、果树、蔬菜、豆科、禾本科等根茎部分进行检查，注意检查有否变褐和坏 死等症状。 5.2.2收集上述可疑根部材料及所夹带的土壤或包装介质材料等和采集的样品一并送实验室进行穿 刺根腐线虫的检验。 6实验室检验 6.1样品分离 对于抽取的样品，仔细检查根部，尽量选取有变褐和坏死等症状的根及根围介质作为分离样品 6.2线虫分离 用浅盘分离法或漏斗法分离线虫，详见附录A。 6.3体视显微镜检查 分离获得的水样在生物体视显微镜下检查。 6.4显微镜检查 挑取线虫若干条制成临时玻片在生物显微镜下镜检，观察线虫的形态结构。 2 GB/T24828—2009 7形态鉴定特征 7.1根腐线虫属形态鉴定特征 7.1.1雌雄虫共同特征 雌雄同型，蠕虫状；体环明显，虫体粗短（体长300μm～900μm）； 头部低平（高度通常小于头基环直径的二分之一），有2个～4个唇环，头部连续到略缢缩，头 架骨化显著； c) 口针粗短，长11um~22um，基部球发达； d) 侧区有4条~8条侧线，通常有4条。 7.1.2雌虫 单生殖腺、前伸，后阴子宫囊通常短于2个阴门处体宽。尾长是肛门处体宽的2倍～3倍，尾圆锥 形，末端钝圆（很少尖）。 7.1.3雄虫 交合刺骨化、稍弯，引带不伸出泄殖腔，交合伞延伸到尾端。 7.2根腐线虫形态鉴定特征 7.2.1测计值 穿刺根腐线虫的测量数据见表2。 表2穿刺根腐线虫测计值 项目 L/μm b V/% T/% a c S/μm 雌虫 343~811 19~32 5.3~7.9 15~24 75~84 15~17 305~574 23~34 16~22 36~58 雄虫 5.4~7.3 13~16 注：L=体长：a=体长/最大体宽；b=体长/自头顶至食道与肠连接处的长度；S=口针长； c=体长/尾长；V=头顶至阴门处长度/体长×100；T=精巢长度/体长×100 7.2.2形态描述 7.2. 2. 1 雌虫 a) 热杀死时虫体近直线形，虫体中等大小，体表环纹较细，侧线四条，中食道球近圆形，宽度为该 处体宽的一半。食道腺从腹面覆盖肠的前端，覆盖长度为30μm～40μm。排泄孔约在食道 肠交界的相对位置上，离虫体前端74μm101μm处，见图1中的I； b）头架发达，唇区稍高，稍缢缩，唇环三个，口针基部球宽圆形，背食道腺开口在口针基部球 2.5um，见图1中的B； ) 受精囊近圆形，内充满精子，宽为该处体宽的三分之二。阴道直且短，长约为阴门处体宽的四 分之一。后阴子宫囊短，长约为阴门处体宽的1倍～1.5倍。肛门与阴门的距离约为尾长的 2.5倍，见图1中的C； d）尾近圆筒形，末端光滑（偶尔有一个至两个线纹），尾腹面有15条～27条体环，见图1中的 D、E。 7.2.2.2雄虫 a）与雌虫体形相似,普遍发生，见图1中的A、H； 侧线四条，排泄孔约在离虫体前端66μm～79μm处，见图1中的H； 交合刺骨化略成弓形，长为14μm～17μm；引带长为3.9μm～4.2μm；交合伞包到尾端，见 c) 图1中的F、G。 3