ICS 71. 080.40 G 15 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 24773—2009 乌索酸纯度的测定 高效液相色谱法 Determination of purity for ursolic acid- High performance liquid chromatographic method 2009-12-15发布 2010-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T24773—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中国石油和化学工业协会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会有机化工分技术委员会（SAC/TC63/SC2)归口。 本标准负责起草单位：宜春学院。 本标准参加起草单位：北京天宝物华生物技术有限公司。 本标准主要起草人：李开泉、叶文峰、曾晓敏、邹盛勒、钱渊华、韩笑、余国平、彭军平， GB/T24773—2009 乌索酸纯度的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定乌索酸纯度的试验方法。 本标准适用于从杷叶、迷送香等植物中提取的乌索酸产品中乌索酸质量分数的测定 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而构成本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法（ISO3696：1987，MOD) 3试验方法 3.1警示 试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况，操作者应采取适当的安全和防护措施。 3.2方法提要 用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品溶液中目标化合物与杂质分离，用紫 外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中乌索酸的质量分数。 3.3试剂 3.3.1水，GB/T6682—2008，二级：经0.45um滤膜过滤并超声脱气。 3.3.2甲醇（色谱纯）。 3.3.3乌索酸标准样品：国家有证标准样品，乌索酸的质量分数≥99.8%。 3.4仪器 3.4.1高效液相色谱系统 3.4.1.1高压泵：无脉冲，能将流量保持在0.1mL/min~10.0mL/min。 3.4.1.2定量环：10μL。 3.4.1.3紫外吸收检测器：可变波长。 3.4.1.4数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。 3.4.2抽滤系统 抽滤系统使用孔径为0.45μm的纤维素酯滤膜（用于流动相的预处理）。 3.4.3过滤系统 过滤系统使用孔径为0.45μm的纤维素酯滤膜（用于样品的预处理）。 3.4.4进样器 自动进样器，或微量进样针（HPLC专用）：50μL。 3.5色谱分析条件 图A.1，各组分的保留时间参见附录A表A.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均 可使用。 1 GB/T24773—2009 表1色谱柱和典型色谱操作条件 5um多孔球形，以硅胶为基质，表面键合Cis的反相色谱柱，柱长 色谱柱 250mm，柱内径4.6mm 柱温 室温 流动相 甲醇：水=88：12（体积比） 流动相流量/（mL/min） 1. 0 UV检测波长/nm 210 进样量/μL 10 3.6分析步骤 3.6.1乌索酸标准样品溶液的制备 称取0.010g乌索酸标准样品，精确至0.00001g，用甲醇溶解，转移至10mL容量瓶，用甲醇稀释 至刻度。 3.6.2样品溶液的制备 称取0.010g实验室样品，精确至0.00001g，用甲醇溶解，经0.45μum滤膜过滤后置于10mL容 量瓶，用甲醇稀释至刻度，作为样品溶液 3.7测定 按高效液相色谱操作规程开机预热，调节温度及流量，达到分析条件并基线平稳后，用微量进样针 （HPLC专用）取标准样品溶液（3.6.1)10μL，进样（或自动进样），记录标准样品溶液乌索酸峰面积A2； 用微量进样针（HPLC专用）取样品溶液（3.6.2)10uL，进样（或自动进样），记录样品溶液乌索酸峰面 积Ar。 3.8结果计算 乌索酸的质量分数w，数值以%表示，按式（1)计算： Am.w×100 (1) Azm 式中： A—样品溶液乌索酸峰面积； 标准样品溶液乌索酸峰面积； 标准样品溶液中乌索酸标准样品的质量的数值，单位为克（g）； m—试样的质量的数值，单位为克（g）； 乌索酸标准样品中乌索酸的质量分数，%。 4重复性 取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值或相对差值符合 产品标准的规定。 试验报告 试验报告应包括下列内容： a)# 样品名称、批号、采样地点、采样日期及时间等； b）本标准代号； c) 分析结果； 测定中观察到的任何异常现象和任何的细节及其说明； e) 分析人员姓名及分析日期。 2 GB/T 24773—2009 附录A （资料性附录） 乌索酸纯度的测定典型高效液相色谱图和保留时间 A.1图A.1给出了乌索酸典型高效液相色谱图 6 0 5 10 15 20 25 附间/min 1、2——溶剂； 3、4——未知； 乌索酸。 图A.1 乌索酸纯度的测定典型高效液相色谱图 A.2 表A.1给出了各组分的保留时间。 表A.1 各组分的保留时间 峰序 组分名称 保留时间/min 3 未知 7.817 4 未知 10.860 5 乌索酸 13.575