ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T24831—2009 香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法 Methods for quarantine and identification of the burrowing nematode Radopholus similis(Cobb,1893)Thorne,1949 2009-12-15发布 2010-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 24831—2009 前言 本标准的附录B为规范性附录,附录A、附录 C为资料性附录。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国 江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局和中华人民共和国深圳出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：葛建军、戚龙君、粟寒、杜宇、张明、李芳荣、李牛贵、龙海， GB/T24831—2009 香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法， 本标准适用于观赏植物、蔬菜、果树等多种植物根部和土壤及栽培介质中的香蕉穿孔线虫检疫 鉴定。 2规范性引用 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 SN/T2122进境植物及植物产品检疫抽样 3鉴定依据 英文俗名：burrowing nematode、pepper yellows nematode、slow wilt nematode,citrus burrowing nematode,banana burrowing nematode. 学名：Radopholus similis(Cobb,1893）Thorne,1949 异名:Radopholus similis citrophilus Huettel,Dickson &Kaplan,l984 Anguillulina granulosa(Cobb,1893)Goodey,1932 Tetylenchus granulosus(Cobb,1893)Filipjev,1936 Radopholus granulosus(Cobb,1893)Siddiqi,1986 Anguillulinaacutocaudatus(Zimmermann,1898)Goodey,1932 Tylenchorhynchusacutocaudatus(Zimmermann,1898)Filipjev,1934 Radopholusacutocaudatus(Zimmermann,1898)Siddiqi,1986 Tylenchus biformis Cobb,1909 Anguillulina biformis(Cobb,1909)Goodey,1932 Radopholus biformis(Cobb,1909)Siddiqi,1986 RadopholuscitrophilusHuettel,Dickson &.Kaplan,1984 分类地位：线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、短体线虫科（Praty lenchidae）、穿孔线虫属（Radopholus） 香蕉穿孔线虫是一种根部迁移性内寄生线虫，危害寄主植物呈现如下症状： 线虫一般穿刺根表皮进入皮层，在根的外部形成多个暗黑色的斑痕，接着邻近的斑痕融合，根 的皮层组织萎缩，变黑；严重危害时，斑痕可环割根；对于整个根系而言，表现为根系明显减少。 一生姜（大姜）等根茎受侵害可造成组织菱缩，表现为根茎小、干缩。 一地上部分表现为生长不良，叶片褪绿、黄化、叶片较少等症状，植株矮化、衰退，甚至萎、死亡。 香蕉穿孔线虫的寄主非常广泛，达数百种之多，主要侵染单子叶植物的芭蕉科Musaceae（芭蕉属 Musa和鹤望兰属Strelizia）、天南星科Araceae（喜林芋属Philodendron和花烛属Anthurium）、竹芋 科Marantaceae（肖竹芋属Calathea）和凤梨科（果子蔓属Gumania和丽穗凤梨属Vriesea等），但也危 害双子叶植物。香蕉穿孔线虫的主要农作物和经济作物寄主包括香蕉、胡椒、芭蕉、椰子、槟榔、可可、芒 果、柑橘、咖啡、茶树、美洲柿、鹦梨、油柿、生姜、花生、大豆、高梁、甘蔗、茄子、番茄、马铃薯、甘薯、薯、 1 GB/T24831—2009 酸豆、姜黄、小豆蔻、肉豆蔻、蚕豆、油棕、山葵、王棕等 香蕉穿孔线虫的形态学特征、传播途径、寄主范围和地理分布是制定该标准的主要依据。 符号和缩略语 4 -测量的线虫标本数目； n L一一虫体体长(mm或μm)； a- 体长/最大体宽； b 体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离； b一一体长/虫体前端至食道腺末端的距离； 体长/尾长； c 尾长/肛门处体宽； St. 口针长度（μm）； Sp. 交合刺长度（μm)； Gub. 引带长度（μm）； V- 虫体前端至阴门的距离×100/体长。 仪器、用具 5.1 生物显微镜（100X以上）。 5. 2 生物体视显微镜（10X以上，具透射光源）。 5. 3 电热恒温箱。 5. 4 载玻片和凹玻片。 5.5 盖玻片。 5.6 网筛（20目、100目、500目）。 5.7 烧杯(500mL、1000mL)。 5.8 漏斗。 5.9 漏斗架。 5.10 乳胶管或硅胶管。 5. 11 止水夹。 5.12 小镊子。 剪刀。 5.13 5.14 挑针。 5. 15 浅盘。 5.16 线虫滤纸或卫生纸。 5. 17 酒精灯。 5.18 钟面皿或培养皿。 5.19 加热板。 5.20 干燥器。 5.21 试管。 5.22 水浴锅。 SAC 6药品 6. 1 4%甲醛。 6. 2 指甲油。 2 GB/T24831—2009 6.3甘油。 6.495%酒精。 6.5石蜡。 7现场检疫 7.1抽样 具体抽样方法见SN/T2122。 7.2外观症状的检查 7.2.1对花卉、观赏植物、果树、蔬菜等根及根茎部分进行检查，注意检查是否有变褐和坏死等症状 7.2.2收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤或栽培介质等，和采集的样品一并送实验室进行香蕉穿 孔线虫的检验。 8实验室检验 8.1样品分离 对于抽取的样品，仔细检查根部，尽量选取有变褐和坏死等症状的根及根围介质作为分离样品。 8.2线虫分离 用浅盘分离法或漏斗法分离线虫，具体分离方法见附录A。 8.3体视显微镜检查 分离获得的线虫样在生物体视显微镜下检查。 8.4显微镜检查 挑取线虫若干条制成临时玻片在生物显微镜下镜检，观察线虫的形态 9形态鉴定特征 9.1穿孔线虫属形态鉴定特征 9.1.1雌虫 虫体长0.4mm~0.9mm，a值在20~30之间； 一头部低，不缩或稍缢缩，头架骨化显著； 口针粗短，14μm~23μm，基部球发达； 中食道球发达，后食道腺叶较长叶状从背部覆盖肠； 侧区刻线3条～7条，非网格化； 一无颈乳突，侧尾腺孔常位于尾的前部； 一双生殖腺、对伸，或后生殖腺退化，授精囊园至卵园形，内多有杆状精子； 尾长圆锥形至亚圆柱形，长为肛门处体宽的2倍～4倍，末端窄圆至稍尖。 9.1.2雄虫 头部高，显著缢缩呈球状： 一口针和食道明显退化； 一交合伞延伸到近尾端，极少延伸到尾端； 引带大，伸出泄殖腔。 9.2香蕉穿孔线虫形态鉴定特征 9.2.1测计值 香蕉穿孔线虫的测量数据见表1。 3