ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 31788—2015 松球果锈病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Cronartium conigenum Hedgcock et Hunt 2015-07-03发布 2015-11-27实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 31788—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫 局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨翠云、魏亚东、孙娟、沈建国、胡培龙、于翠、阑春月。 I GB/T317882015 松球果锈病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物中松球果锈病菌（CronartiumconigenumHedgcocketHunt)的检疫鉴定方法。 本标准适用于所有松属（Pinusspp.）、栎属（Quercusspp.）和其他寄主苗木中携带的松球果锈病菌 的检疫鉴定。 2仪器设备和试验用具 仪器设备 2.1 生物体式显微镜、生物显微镜（具油镜和测微尺）、普通天平（感量0.1g）、超净工作台、高压灭菌器 冰箱。 54G 2.2试验用具 斧子、锯子、手持放大镜、手术刀、手术剪、白色磁盘、镊子、载玻片、盖玻片、吸管、酒精灯。 3现场检疫 3.1 松属植物：主要检查树木主干和分枝是否变形，球果是否受侵后膨大，球果是否在一层非常薄的纸 质的表面下产生大量的锈孢子。锈孢子新鲜时呈明亮的橙色，干燥时呈淡黄色。症状图参见附录A。 松球果锈病菌侵染松属植物引起的症状很易与Cronartiumstrobilinum（Southeasternconerust， orsouthernconerust)引起的症状相混淆，Cronartiumstrobilinum为害症状和其他信息参见附录B和 附录 C。 3.2栎属植物：主要检查树木的叶片边缘底部是否有棕色渐变到黑色的绒状物出现，是病菌的冬孢 子堆。 4实验室鉴定 4.1制样 将送检的植物样品通过挑片、切片等方法制成检测样品，在显微镜下直接观察病菌孢子的形态 特征。 4.2病菌的形态特征 4.2.1病菌的孢子类型 松球果锈病菌一生可产生5种类型的孢子，侵染松属植物产生性孢子和锈孢子，侵染栎属（Quercus spp.）和栗属（Castaneaspp.）植物产生夏孢子，冬孢子和担孢子。 1 GB/T31788—2015 4.2.2病菌的形态 锈孢子堆过度生长，直径1mm～5mm（平均2.6mm），从上往下观察时，通常分散孤立，呈近圆 形，很少汇合。黏度一致，新鲜时呈明亮的橙色。上层壁像纸一样薄，沿着堆的边缘折裂，呈片状的剥 落，往往留下撕裂状的边缘，由不规则、棍棒状或纺锤形的厚壁细胞组成，（28μm～100um）× (14μm~32μm），内壁有条纹。锈孢子（19μm～51μm）X（12μm～25μm)（平均35μmX18μm）,呈 卵球形或椭圆体，往往形状不规则，壁厚2um～5μm，粗糙多疣状结节。 夏孢子通常生长在萎黄叶片的背面和表皮下面，分散或者聚集，很少汇合，壁迅速消失。夏孢子伴 有小而透明的棕色侧丝，（16μm~36μm）×（11μm~25μm）（平均25μm×18μm），从卵球形到椭圆 形，大量孢子聚在一起呈现明黄色，壁厚2um～3.5um，有1um高的圆形刺，通常有3个～4个萌 发孔。 冬孢子堆是夏孢子堆的衍生物，冬孢子堆圆柱形，（2.8mm～6mm）×（70μm～150μm），由栗色 变为淡棕色。冬孢子(20μm~50μm）×（10μm～23μm）（平均34μm×16μm），从圆柱形到梭形，淡 棕色，壁厚2μm～6μm，几乎光滑。 担子（32μm40μm）×（7μm~9μm），从圆柱形到尿囊形，弯曲或者呈钩状，两端圆形，透明，壁 薄，有3个横隔。观察不到担孢子。 松球果锈病菌的形态鉴别特征及形态示意图，参见附录A。 5结果判定 如果待检样品上病菌为害产生的症状与3.1或者3.2所描述的相符，经过镜检病菌孢子的形态特征 与6.2所描述的相符，则判定样品中检出松球果锈病菌。 6样品保存与结果记录 6.1样品保存 将检出松球果锈病菌的植物病材料妥善保存于4℃冰箱中，至少保存12个月，以备复核。保存期 满后，经高温高压灭菌处理。 6.2结果记录 记录包括：样品来源、种类、取样人员、实验的时间、地点、方法和结果、检验检疫员的签字等。应包 含本标准规定的检测方法所产生的数据及图片：病菌为害症状的图片，病菌各类孢子的形态特征图片和 测量数据。 N GB/T317882015 附录A （资料性附录） 松球果锈病菌相关资料 A.1背景资料 A.1.1病菌基本信息 中文名：松球果锈病菌 学名：Cronartium conigenum Hedgcock et Hunt 英文名：Southwesternconerust 分类地位：真菌界（Fungi），担子菌门（Basidiomycotina），冬孢菌纲（Teliomycetes），锈菌目（Uredi- nales），柱锈菌科（Cronartiaceae），柱锈菌属（Cronartium）。 传播途径：松球果锈病菌主要以风媒传播。在风力的作用下，锈孢子可传播很长的距离，并可存活 相当长的一段时间。 A.1.2方法原理 松球果锈病菌转主寄生松属和栎属植物可以产生典型的发病症状；病菌一生可以产生5种类型的 孢子，并具有明显的形态特征。根据松球果锈病菌的寄主范围、症状特点以及病原菌的形态特征，进行 病菌的检疫鉴定。 A.2分布 加、萨尔瓦多、危地马拉、洪都拉斯和尼加拉瓜等。我国未见分布报道。 A.3寄主范围 松球果锈病菌的锈孢子寄主主要是加勒比松（Pinuscaribaea）、道格拉斯松（P.douglasiana）、湿地 松（P.elliottii）、光叶松（P.leiophylla）、济华华松（P.leiophyllavar.Chihuahuana）、马西姆松 （P.Mariminoi）、米却肯松（P.michoacana）、山松（P.montezumae）、卵果松（P.oocarpa）、展叶松 （P.patula）、拟北美洲乔松（P.pseudostrobus）、野松（P.rudis）和卷叶松（P.teocote）等。 自然状态下，松球果锈病菌的冬孢子寄生主要是栎属（Quercusspp.）中的艾氏栎（Quercus emoryi）、灰橡木（Q.grisea）、Q.hypoleuca和银叶橡树（Q.hyplieucoides）等。 在室温大棚条件下，人工接种则侵染栎属（Quercusspp.）中的海岸栎（Quercusagrifolia）、美国橡 树（Q.alba）、土耳其栎（Q.cerris）、猩红栎（Q.coccinea）、蓝橡树（Q.douglasii）、根柏栎 （Q.gambelii）、强生栎（Q，geminata）、鹅卵石橡树（Q.imbricaria）、大果栎（Q.macrocarpa）、马利兰 德栎（Q.marilandica）、Q.minor、沼生栎（Q.palustris）、栓质栎（Q.phellos）、悬铃树叶栎（Q.pla- tanoides）、矮栎（Q.prinus）、英国栋（Q.robur）、北美红栎（Q.rubra）、黑栎（Q.velutina）和弗吉尼亚栎 （Q.virginiana）。还可侵染栗属（CastaneaMill.）中的C.alnifoliaXmollissima、美洲栗 （C.dentata）、板栗（C.mollissima）、矮生板栗（C.pumil），欧洲栗（C.sativa），以及滇烤（Castanopsis 3 SAC