ICS 65.100 B 13 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 31270.16—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第16部分：土壤微生物毒性试验 Test guidelines on environmental safety assessment for chemical pesticides- Part 16:Soil microorganism toxicity test 2014-10-10发布 2015-03-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T31270.16—2014 前言 GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分： 第1部分：土壤降解试验； 第2部分：水解试验； 第3部分：光解试验； 第4部分：土壤吸附/解吸试验； 第5部分：土壤淋溶试验； 第6部分：挥发性试验； 一第7部分：生物富集试验； 第8部分：水-沉积物系统降解试验； 第9部分：鸟类急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验； 第11部分：家蚕急性毒性试验； 第12部分：鱼类急性毒性试验； 第13部分：泽类急性活动抑制试验； 一第14部分：藻类生长抑制试验； 第15部分：蚯蚓急性毒性试验； 第16部分：土壤微生物毒性试验； 第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验； 第18部分：天敌两栖类急性毒性试验； 第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验； 第21部分：大型甲壳类生物毒性试验。 本部分是GB/T31270的第16部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分负责起草单位：农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所。 本部分主要起草人：程燕、范继巧、王娜、韩志华、赵玉艳、王彦华、李少男、蔡道基。 I GB/T 31270.16—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第16部分：土壤微生物毒性试验 1范围 GB/T31270的本部分规定了CO，吸收法和氮转化法测定化学农药对土壤微生物毒性的材料、条 件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。 本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 化学农药 chemical pesticide 利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造， 创新而成，为仿生合成农药。 同义词：有机合成农药syntheticorganicpesticide。 [NY/T1667.1—2008,定义2.2.1] 2.2 原药 technical material 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必 要时可加人少量的稳定剂。 [NY/T1667.2—2008,定义2.5.1] 2.3 制剂formulationproduct 由农药原药（或母药）和助剂组成、使用状态稳定的产品。 [NY/T1667.2—2008,定义2.4] 2.4 有效成分active ingredient;a.i. 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分。 [NY/T1667.2—2008,定义2.1] 2.5 test substance 供试物 试验中需要测试的物质。 2.6 供试物对土壤微生物呼吸强度的影响程度，包括抑制率和促进率。供试物处理土壤呼吸强度低于 对照土壤时，表现为抑制，供试物处理土壤呼吸强度高于对照土壤时，表现为促进。 1 GB/T31270.16—2014 2.7 氮转化nitrogentransformation 微生物通过氨化和硝化作用，将含氮有机物最终降解为无机终产物硝酸盐的过程。 3试验概述 3.1方法概述 土壤微生物毒性试验包括CO2吸收法和氮转化法，根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方 法进行试验。 3.2CO,吸收法 在标本瓶内放置两只小烧杯，其中一只盛放土壤，另一只盛放碱液（如NaOH溶液），用于吸收土壤 微生物呼吸所释放的CO2。以模拟农药常用量、10倍常用量、100倍常用量时土壤表层10cm土壤中 的农药含量设3种不同处理浓度，将标本瓶密闭并置于25℃±1℃、黑暗条件下培养，并保持土壤含水 量为最天田间持水量的40%～60%，于试验开始后的第1天、第2天、第4天、第7天、第11天、第15天 更换出密闭瓶中的碱液，测定吸收的CO，量。评价供试物对土壤微生物活性的影响。 3.3氮转化法 过筛的土壤与适量有机底物混合后用供试物处理，同时设置一组不加供试物的对照。试验至少需 设置2个测试浓度，可参考供试物由间最大施用量设置。将土壤置于黑暗、20℃土2℃的条件下培养， 并保持土壤含水量为最大田间持水量的40%~60%，在培养0d、7d、14d和28d后，从处理组和对照 组中取出一定量的王壤样品，用合适的溶剂浸提并测定提取液中硝酸盐的含量。比较处理组与对照组 的硝酸盐形成率，计算处理组相对于对照组的百分比差异。试验至少持续28d，如果第28天处理组与 对照组的差异不小于25%，则试验需延长，最长至100d。 4试验方法 4.1材料和条件 4.1.1供试物 农药制剂、原药或纯品。 4.1.2试验土壤 4.1.2.1CO,吸收法 选用3种具有代表性的、理化性质各异的土壤，试验前先去除土壤中的粗大物块（如石块、植物残体 等），然后过0.85mm筛。 4.1.2.2 2氮转化法 试验只需一种土壤，对土壤的要求参见附录A，土壤在用于试验前要先进行处理，先去除土壤中的 粗大物块（如石块，植物残体等），然后过筛，使土壤颗粒不大于2mm。 存，最长保存3个月（土壤的采集、贮存方法参见附录B）。经过储存的土壤，在试验前需进行预培养 2 GB/T31270.16—2014 2d～28d。预培养期间土壤的培养条件应与试验条件一致。此外，氮转化法所用的土壤在试验前还需 补充适当的有机底物，例如，首-青草-青贮谷粉（主要组成部分：紫花首Medicagosativa），C/N比 在12/1～16/1之间。建议首粉与土壤的比率为每千克土壤（干重）用首粉5g。 4.1.3主要仪器设备 主要仪器设备如下： 搅拌器； 一培养箱； —振荡器； 一离心机； 一滴定仪； 一硝酸盐测定仪； 一标本瓶及其他玻璃器皿等。 4.1.4试验条件 4.1.4.1CO2吸收法 土壤样品的培养条件为25℃土1℃，黑暗。试验过程中，保持土壤样品含水量在田间最大持水量 的40%～60%之间，变化范围为土5%。如有需要，可添加蒸馏水和去离子水进行调节。 4.1.4.2 氮转化法 土壤样品的培养条件为20℃土2℃，黑暗。试验过程中，保持土壤样品含水量在田间最大持水量 的40%～60%之间，变化范围为土5%。如有需要，可添加蒸馏水和去离子水进行调节。 OVS 4.2i 试验操作 4.2.1CO2吸收法 4.2.1.1 处理与对照的设置 每种土壤设3种不同浓度处理，以模拟农药常用量（推荐的最大用量）、10倍量、100倍量时土壤表 层10cm土壤中的农药含量（计算时假设土壤容重为1.5g·cm），同时设置一组空白对照，每组至少设 置3个重复。 4.2.1.2受试物质的制备 水溶性供试物一般用水溶解制备，避免使用水以外的其他液体，如内酮、三氯甲烷等有机溶剂，以防 0.5mm）等惰性固体，最后等溶剂完全挥发后再将石英砂与土壤混合。为使供试物在土壤中达到一个 最佳的分布状态，建议每干克干重土壤中加入砂的比例为10g/kg。对照组的土壤样品用等量的水或 砂进行处理。混合时，应确保处理组中的供试物在土壤样品中均匀分布，同时要避免土壤压紧或结块。 4.2.1.3土壤样品的培养 将混合后的土壤装于小烧杯中，与另一个装有标准碱液的小烧杯一起置于密闭瓶中，于25℃士 1℃、黑暗条件下培养。试验过程中，保持土壤样品含水量在田间最大持水量的40%～60%之间，变化 范围为土5%。如有需要，可添加蒸留水和去离子水进行调节。 3