ICS 71.100.70 Y 42 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 30926—2014 化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of 7 kinds of vitamin C derivatives in Cosmetics- High performance liquid chromatography-tandem Mass spectrometry 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30926—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 术研究中心、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。 本标准主要起草人：手希琴、郑顺利、胡侠、潘炜、沈敏、钱茵 I GB/T30926—2014 化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 四异棕榈酸酯的测定一一高效液相色谱串联质谱法。 本标准规定的高效液相色谱串联质谱法适用于化妆品中7种维生素C衍生物的定量测定。 本标准方法对所有目标化合物检出限均为3uμg/g，对所有目标化合物定量限均为10ug/g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 利用水和二氯甲烷双液相体系将水溶性维生素C衍生物（抗坏血酸葡萄糖苷，3-O-乙基抗坏血酸， 抗坏血酸磷酸酯盐与化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离，水提物用C18固相萃取小柱脱除其 中的非极性强的干扰成分后，用反相高效液相色谱分离，串联四级杆质谱检测，标准曲线外标法定量。 油溶性维生素C衍生物（抗坏血酸硬脂酸酯，抗坏血酸棕榈酸酯，抗坏血酸二棕榈酸酯,抗坏血酸 四异棕榈酸酯）用有机溶剂溶解提取，必要时用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质后，用反相高效液相色 谱分离，串联四级杆质谱检测，标准曲线外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1标准物质：7种维生素C衍生物的化合物名称、INCI名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量 和纯度参见附录A。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3异丙醇：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5二氯甲烷。 4.6无水乙醇。 4.7 四氢呋喃。 4.8 环已烷。 4.9 丁基羟基茴香醚（BHA)。 4.10 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）。 1 GB/T30926—2014 4.11 维生素E醋酸酯。 4.12柠檬酸。 4.13 亚硫酸氢钠（NaHSO，）。 4.14甲酸。 4.15乙二胺四乙酸(EDTA)二钠。 4.16 C1g固相萃取小柱：200mg/3mL。使用前，依次用3mL甲醇和3mL水活化 4.17 硅胶固相萃取小柱：200mg/3mL。使用前，用3mL环已烷（4.8）活化。 4.18溶液I：称取0.0037gEDTA二钠，0.5gNaHSO，用500mL蒸馏水溶解。 4.19溶液Ⅱ：称取0.0037gEDTA二钠，0.5gNaHSO3，用500mL20%甲醇水溶液（以100ml 甲醇十400mL水配制）溶解。 4.20溶液Ⅲ：称取BHA,BHT，VE醋酸酯，柠檬酸各0.1g，用500mL无水乙醇（4.6)溶解。 4.21溶液IV：称取BHA,BHT，VE醋酸酯，柠檬酸各0.1g，用500mL四氢呋喃（4.7)溶解。 4.22溶液V：称取BHA,BHT，VE醋酸酯各0.1g，用500mL环已烷（4.8）溶解。 4.23溶液V：向200mL溶液Ⅲ（4.20)中加入1mL甲酸（4.14）。 200mL甲醇+300mL水配制）溶解。 4.250.05%甲酸的水溶液：向1L水中加人0.5mL甲酸（4.4）。 4.260.05%甲酸的甲醇异丙醇溶液：500mL甲醇+500mL异丙醇+0.5mL甲酸（4.4)。 4.28标准储备液 4.28.1 油溶性维生素C衍生物标准储备液 抗坏血酸四异棕榈酸酯）各标准物质250mg分别置于4个25mL的棕色容量瓶中，用溶液IV（4.21）溶 解定容，配制浓度为10mg/mL的标准储备溶液，于4℃~6℃条件下避光保存，抗坏血酸硬脂酸酯、抗 坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸二棕榈酸酯的保存期为3天,抗坏血酸四异棕榈酸酯的保存期为2周。 4.28.2水溶性维生素C衍生物标准储备液 准确称取3种水溶性维生素C衍生物（抗坏血酸葡萄糖苷，3-O-乙基抗坏血酸，抗坏血酸磷酸酯 钠）各标准物质250mg分别置于4个25mL的棕色容量瓶中，用溶液Ⅱ（4.19）溶解定容，配制浓度为 10mg/mL标准储备液，于4℃6℃条件下避光保存，保存期为3天。 4.29系列标准溶液 4.29.1系列标准溶液A 将4种油溶性维生素C衍生物的标准储备液（4.28.1）等体积混合并用溶液IV（4.21)稀释10倍，配 制1mg/mL的混合标准溶液。用溶液IV（4.21)逐级稀释，配制成浓度分别为1000μg/L，800μg/L， 600μg/L，200μg/L，100μg/L的系列标准混合溶液。需现用现配。 4.29.2系列标准溶液B 将3种水溶性维生素C衍生物的标准储备液（4.28.2），等体积混合并用溶液I（4.18）稀释10倍， 配制1mg/mL的混合标准溶液。用溶液I（4.18）逐级稀释，配制成浓度分别为1000μg/L， 2 2K GB/T30926—2014 800μg/L，600μg/L，200μg/L，100μg/L的系列标准混合溶液。需现用现配。 注：鉴于本方法中抗坏血酸磷酸酯盐（一般为镁盐或钠盐形式)均以抗坏血酸磷酸酯形式被检出，方法无法分辨是 抗坏血酸的哪种盐形式。为统一测试结果，建议选择抗坏血酸磷酸酯钠作为标准物质，测试结果则报告以抗坏 血酸磷酸酯计的含量[按式(2)进行]。 4.300.2um微孔聚丙烯滤膜针式过滤器。 4.310.2μm微孔尼龙滤膜针式过滤器。 5仪器和设备 5.17 高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪（ESI源）。 5.2 分析天平：感量0.1mg；0.01mg 漩涡混合器。 5.3 5.4 超声波清洗器。 5.5 离心机：转速不小于5000r/min，离心试管容量10mL，15mL。 5.6 离心机：转速不小于12000r/min，离心试管容量2mL。 5.7 移液枪或移液器。 6分析步骤 6.1油溶性维生素C衍生物的分析 6.1.1试样制备 6.1.1.17 膏霜、乳液、化妆水、粉基类等化妆品样品的制备 1min，室温超声10min后，移取1mL～2mL于2mL塑料离心管中，12000r/min离心5min，转人进 样瓶中待测，或涡旋混勾后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤（4.30）转人进样瓶中 待测。 6.1.1.2甲油类化妆品样品的制备 称取0.1g样品（精确至0.001g）于10mL具塞离心管中，向离心管中分别准确加入4mL溶液V （4.21）和1mL溶液V（4.22），涡旋混合1min，移取1mL～2mL于2mL具塞塑料离心管中， 12000r/min离心5min，转人进样瓶中待测，或涡旋混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙 烯滤膜过滤器（4.30)转入进样瓶中待测。 6.1.1.3唇膏等蜡基化妆品样品的制备 称取0.1g样品（精确至0.001g）于10mL具塞离心管中，向离心管中准确加人2mL溶液 V（4.22）于50℃水浴中超声分散至澄清透明，然后向离心管中准确加入3mL溶液Ⅲ（4.20），涡旋混匀 1min，移取1mL～2mL于2mL塑料离心管中,12000r/min离心5min,转人进样瓶中待测,或涡旋 混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤器（4.30）转人进样瓶中待测。 必要时，用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质。具体操作如下： 称取0.1g样品（精确至0.001g）于10mL具塞离心管中，向离心管中加入3mL溶液V（4.22）于 50℃水浴中超声分散至澄清透明。将所有溶液趁热过硅胶固相萃取小柱（4.17），再用1mL～2mL环 已烷（4.8）（50℃水浴中预热）润洗离心管，润洗溶液一并加入硅胶固相萃取小柱，待上述所有溶液通过 3