ICS 07.080 A21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38093—2019 B-内酰胺类抗生素高分子聚合物测定 凝胶色谱法 Determination of the high-molecular polymers in β-lactam antibiotics- Gel chromatography 2019-10-18实施 2019-10-18发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T38093—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院、北京萨姆伯科技有限公司。 本标准主要起草人：许益鹏、叶子弘、俞晓平、马爱进、申屠旭萍、张雅芬、崔海峰、郝帅。 GB/T38093—2019 β-内酰胺类抗生素高分子聚合物测定 凝胶色谱法 1范围 本标准规定了用凝胶色谱法测定β-内酰胺类抗生素中高分子聚合物的方法。 本标准适用于青霉素V钾、头孢曲松、头孢噻吩、头孢拉定、头孢辛、头孢哌酮、头孢唑林、头孢替 唑、苯唑西林、盐酸普鲁卡因10种β-内酰胺类抗生素研制和生产中内源性高分子聚合物的测定。 本方法检出限为0.08uμg。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本活用干本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 内源性高分子聚合物 endogenous high-molecular polymers β-内酰胺类抗生素分子自身聚合而成的一类高分子物质 4原理 根据相对分子质量的大小，利用高效凝胶色谱柱对β-内酰胺类抗生素及其高分子聚合物进行分 离，经紫外检测器在254nm测定，以色谱峰保留时间定性，以峰面积进行定量。 5试剂或材料 5 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 5.1水:GB/T6682，一级水。 5.2 乙腈(CH,CN):HPLC级 5.3 5mmol/L磷酸盐缓冲液.pH7.0： 准确称取0.432g的磷酸氢二钠和0.312g的二水合磷酸二氢钠，用950mL水溶解，调整pH为 7.0，加水定容到1L，0.22um孔径的滤膜过滤 5.4β-内酰胺类抗生素：纯度≥98%。5Zc 6 仪器设备 6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。 1 GB/T38093—2019 2高效凝胶色谱柱：粒径为5μm，孔径12nm的硅胶基质，长度30cm，内径7.8mm，理论塔板数 6.2 10000以上。 6.3电子天平：感量为0.001g。 6.4溶剂过滤系统：滤膜孔径为0.22μm。 7测定步骤 7.1样品制备 按需称取一定量的抗生素样品，根据样品的溶解特性，易溶于水的样品用5mmol/L磷酸盐缓冲液 进行溶解，微溶于水或难溶于水的样品用乙睛或乙腈和5mmol/L磷酸盐缓冲液的混合液溶解，并用 0.22um孔径的滤膜过滤。青霉素V钾、头孢曲松、头孢噻盼、头孢拉定、头孢呋辛、头孢替唑、苯唑西 林和盐酸普鲁卡因用5mmol/L磷酸盐缓冲液进行溶解；头孢哌酮和头孢唑林用体积比为1：1的 5mmol/L磷酸盐缓冲液和乙睛的混合液溶解。 7.2色谱条件 色谱仪为高效液相色谱仪，色谱柱为高效凝胶色谱柱，等度洗脱，流动相为体积比为90：10的 5mmol/L磷酸盐缓冲液与乙睛的混合液，流速为0.8mL/min，进样体积为10μL，柱温为25℃，检测 波长为254nm。 7.3标准曲线的制作 将抗生素标准品按梯度溶解、稀释后，配制成5个以上浓度梯度的标准品溶液。将配好的标准品溶 线性回归分析，选择线性回归拟合程度R²值在0.95以上的5个连续浓度梯度，建立标准曲线。青霉素V 钾的线性浓度范围为0.04mg/mL~5mg/mL；头孢曲松的线性浓度范围为0.005mg/mL~5mg/mL； 头孢噻吩的线性浓度范围为0.008mg/mL~5mg/mL；头孢拉定的线性浓度范围为0.04mg/mL~ 5mg/mL；头孢呋辛的线性浓度范围为0.0016mg/mL～5mg/mL；头孢哌酮的线性浓度范围为 0.0016mg/mL~5mg/mL；头孢唑林的线性浓度范围为0.065mg/mL~2.5mg/mL头孢替唑的线 性浓度范围为0.0016mg/mL~5mg/mL；苯唑西林的线性浓度范围为0.0016mg/mL~5mg/mL；盐 酸普鲁卡因的线性浓度范围为0.04mg/mL~5mg/mL。 7.4试样溶液测定 根据标准曲线，将试样按7.1进行溶解，使得其浓度落在标准曲线的浓度范围内进行测定。 8结果分析 按式（1）计算： SAO A1 =100 ....(1) m 式中： A1——抗生素试样中高分子聚合物含量，%； SAI——抗生素试样中主成分的峰面积； 抗生素标准品中主成分峰面积所对应的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； 2 GB/T38093—2019 SAo—抗生素标准品中主成分的峰面积； VAI—抗生素试样溶液体积，单位为毫升（mL）； 抗生素试样总量，单位为克（g)。 m 以平行样的平均值为最终的含量值，计算结果保留到小数点后两位。 重复性 9 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。