ICS 07.080 A21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38095—2019 DHA、EPA含量测定 气相色谱法 Determination of docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid contentGas chromatography 2019-10-18实施 2019-10-18发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T38095—2019 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院、中国水产科学研究院南海水产研究所、中国标准化研究院 浙江省海洋水产研究所、北京萨姆伯科技有限公司、河北养元智汇饮品股份有限公司、中国农村技术开 发中心、华测检测认证集团北京有限公司、中国科学院过程工程研究所。 郝帅、姚奎章、戴炳业、董立雅、黄永东、夏君霞、赵慧博、齐兵、崔岩。 GB/T38095—2019 DHA、EPA含量测定 气相色谱法 1范围 本标准规定了用气相色谱法测定二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）含量的方法 本标准适用于鱼油、微藻中DHA、EPA含量的测定。 本标准不适用于乙酯化的鱼油测定。 本方法检出限为10mg/kg，定量限为33mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经三氯甲烷-甲醇法提取油脂，然后经甲酯化后，气相色谱毛细管柱分离，氢火焰离子化检测器 检测，内标法定量。 试剂或材料 4 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水：GB/T6682，一级。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 正已烷：色谱纯。 4.4 DHA：纯度≥98%。 4.5 EPA：纯度≥98%。 4.6+七碳烷酸：纯度≥98%。 4.7 0.8mol/L氢氧化钾-甲醇溶液： 称取5.24g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中，充分混匀。 4.82 2.0mg/mL十七碳烷酸内标储备液： 称取0.0500g十七碳烷酸于25mL容量瓶中，加入适量正已烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 4.9 DHA和EPA标准工作溶液： 分别称取0.0100g的DHA和EPA标准品于5mL容量瓶中，加人适量正已烷使溶解，并稀释至 刻度，摇匀。然后分别取0.1mL，0.2mL0.4mL.0.8mL、1.5mL于5个10mL容量瓶中，分别移入 十七碳烷酸内标储备液2.0mL，加人正已烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 5 仪器设备 5.1气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID)。 1 GB/T38095—2019 5.2 2天平：感量0.01g、0.0001g。 5.3研磨仪。 5.4旋涡式振荡混合器。 5.5超声波破碎仪。 5.6真空干燥箱。 5.7恒温水浴锅。 6 测定步骤 6.1取样 微藻：称取10.00g微藻，研碎后称取1.00g均匀样品，待提取油脂所用。 鱼油：取0.1000g。 6.2提取 取1.00g微藻干粉试样，放人50mL聚四氟乙烯试管中，加入6.0mL蒸馏水，加人三氯甲烷-甲醇 （1：2，体积比）混合液22.5mL，振荡混匀后用超声波破碎仪破碎2min，加入7.5mL三氯甲烷振荡混 勾30s，再加人7.5mL蒸馏水振荡混匀30s，分液漏斗静置分层，分离油层，真空干燥，称重并计算油脂 含量。 6.3脂肪酸甲酯化 匀后15min，加人0.8mol/L的氢氧化钾-甲醇溶液2mL，摇匀后在60℃恒温水浴下反应15min，沿壁 加水到10mL刻度处，静置分层，将上清液全部转移至量器内，用正已烷定容至1mL，稀释一定倍数后 待进样分析 6.4测定 6.4.1气相色谱参考条件 气相色谱参考条件如下： 色谱柱：聚二氰丙基硅氧烷毛细管柱（0.32mm×0.25um×30m），或相当者： b) 载气及流速：载气为氮气，流速为1.5mL/min； c) 柱温程序：初始温度160℃（保持3min），以6℃/min速率升到230℃，保持15min； d) 进样口温度：250℃； e) 检测器温度：280℃； f) 进样量：1uL； g） 进样方式：分流进样，分流比50：1。 6.4.2标准曲线绘制 分别取不同浓度的标准工作溶液和空白溶液（正已烷）各1mL按6.3甲酯化后，依次进样，扣除空 白值，分别测定DHA甲酯、EPA甲酯和十七碳烷酸甲酯的峰面积。 分别以标准工作溶液DHA和EPA的质量浓度与内标物质量浓度的比为横坐标，以DHA甲酯和 EPA甲酯分别与十七碳烷酸甲酯的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。色谱图参见附录A中图A.1。 2 GB/T38095—2019 结果分析 试样中DHA或EPA的含量按式(1)计算： Vn(y -b)pf X 100 =m ...(1) am 式中： w 试样中DHA或EPA的含量，单位为克每百克（g/100g）； A 试液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 试液稀释倍数； n 试样中DHA甲酯或EPA甲酯与十七碳烷酸甲酯的峰面积比； y b 标准曲线的截距； 试液最终内标物的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； DHA甲酯转换为DHA的转换系数（取值0.9590）或EPA甲酯转换为EPA的转换系数 f （取值0.9557)； 标准曲线的斜率； a 试样的质量，单位为毫克（mg）。 m 计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。 重复性 8 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。