ICS 07.080 G 00 中华人民共和国国家标准 GB/T 37874—2019 核酸提取纯化方法评价通则 General rules for evaluation of nucleic acid extraction and purification methods 2019-08-30实施 2019-08-30发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 37874—2019 目 次 前言 I 1 范围 2规范性引用文件 3术语和定义、缩略语·· 4基本要求 指标参数 5 评价方法 6 GB/T 37874—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家标准物质研究中心提出并归口。 本标准起草单位：中国科学院北京基因组研究所、中国计量科学研究院。 本标准主要起草人：孟庆姝、傅博强、胡松年、葛晓萌、谈昕煜、牛春艳、毕小春。 Ⅲ GB/T37874—2019 核酸提取纯化方法评价通则 1范围 本标准规定了核酸提取纯化方法评价的指标参数和评价方法， 纯化方法的一般性评价 本标准不适用于病毒核酸的提取，游离DNA的提取，陈旧样本、微量样本与高度降解样本核酸的 提取方法的评价，也不适用于在提取过程中通过添加外源DNA或RNA以提高提取效率的核酸提取方 法的评价。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）适用于本文件 ISO8655-2：2002活塞式容量测量器第2部分：活塞移液器（Piston-operatedvolumetric-appa ratus—Part 2:Piston pipettes) 3术语和定义、缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 核酸nucleic acid 由核苷酸或脱氧核苷酸通过3°,5'-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。具有非常重要的生物 功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）两类。 ［JJF1265—2010，定义4.42] 3.1.2 标准物质referencematerial 具有足够均匀和稳定的特定特性的物质，其特性被证实适用于测量中或标称特性检查中的预期 用途。 JJF1001—2011,定义8.14 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraaceticacid) OD：光密度（OpticalDensity） 1 SAC GB/T37874—2019 RNA：核糖核酸(RibonucleicAcid) TE：三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸（Tricarboxymethylaminomethane-Ethylenediaminetet raacetic acid) Tris：三羟甲基氨基甲烷（Trishydroxymethylaminomethane） 4基本要求 常规的用于分子生物学提取核酸的样本主要包括新鲜的动植物组织样本、细胞样本、血液样本、唾 液样本和粪便样本等。宜选用新鲜样本进行核酸提取；若不能马上提取，应分装成小份，按照样本特性 与采集情况妥善保存。 5指标参数 5.1核酸完整度 5.1.1一般说明 核酸完整度表征提取过程中保持核酸一级结构（序列)完整而不发生改变的程度。在核酸提取时应 尽量防止物理（剪切力、高温）、化学因素（强酸、强碱）和生物因素（核酸酶）的破坏。根据试验条件和核 酸样品，可以选择琼脂糖凝胶电泳方法进行核酸完整度测定，根据条带位置和不同条带的荧光亮度分析 综合计算评价核酸的完整性。 5.1.2DNA完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，完整基因组DNA电泳结果为一条清晰明亮的条带，条带拖尾或者弥散 代表DNA有部分降解。 5.1.3总RNA完整度 5.1.3.1真核生物总RNA完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，真核生物完整的总RNA电泳结果为清晰的两条条带-28S和18S-核糖 体RNA条带。28S和18S核糖体RNA条带清晰，且两条条带的荧光亮度比值（28S：18S)>1，以满足 后续试验的要求。 5.1.3.2原核生物总RNA完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，原核生物完整的总RNA电泳结果为清晰的两条条带-23S和16S-核糖 体RNA条带。23S和16S核糖体RNA条带清晰，且两条条带的荧光亮度比值（23S：16S）>1，该完整 度可以满足绝大部分后续试验的要求。 SAG 5.1.3.3总RNA降解 用琼脂糖凝胶电泳法检测，如果电泳条带弥散，没有清晰的核糖体RNA条带，为部分降解的RNA 样品；电泳条带呈现极低分子质量处的弥散状，为完全降解的RNA样品。 5.2 提取产量 提取产量是指单位样本中提取得到的核酸（DNA或RNA）的总质量。该指标用于表征提取得率。 2