ICS 65.080 G 20 中华人民共和国国家标准 GB/T 37500—2019 肥料中植物生长调节剂的测定 高效液相色谱法 Determination of plant growth regulators in fertilizer- High performance liquid chromatography 2020-01-01实施 2019-06-04发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T37500—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出， 本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105）归口。 本标准起草单位：上海化工研究院有限公司、山东省产品质量检验研究院、黑龙江省质量监督检测 研究院、云南省化工产品质量监督检验站、四川国光农化股份有限公司、山东农大肥业科技有限公司、上 海化工院检测有限公司。 本标准主要起草人：苏本玉、张娟、段路路、柳羽丰、丁方军、吴攀道、魏厚道、毛红祥、朱海荣、刘卫、 吴凡、姚莎。 1 GB/T37500—2019 肥料中植物生长调节剂的测定 高效液相色谱法 警示一一使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件 1范围 本标准规定了肥料中植物生长调节剂含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水溶性肥料、复合肥料、复混肥料、掺混肥料等肥料中复硝酚钠、2，4-二氯苯氧乙酸 （简称2，4-D）、脱落酸、茶乙酸、氯吡脲、烯效唑、吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸含量的测定。 本标准中各目标物的方法检出限和定量限分别为：复硝酚钠3mg/kg和10mg/kg；2，4-D 5mg/kg和10mg/kg；脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑3mg/kg和10mg/kg；吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸 5mg/kg和10mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样用甲醇进行超声提取，在选定的工作条件下，用高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）进行 测定，以保留时间定性，外标法定量。 4试剂和材料 4.1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中的一级水。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙睛：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 乙酸铵：色谱纯。 4.6 冰乙酸：优级纯。 4.7 甲酸溶液（1+1000）：移取1.0mL甲酸（4.4)与1000mL水混匀。 4.8 乙酸铵溶液（0.77g/L）：称取0.77g乙酸铵（4.5），用水溶解并定容至1000mL。 4.9冰乙酸溶液（1+50）：移取20.0mL冰乙酸（4.6）与1000mL水混匀。 4.102-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、脱落酸、萘乙 酸、氯吡脲、烯效唑、吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸标准品：已知质量分数，W≥98.0%，信息参见附录A中表 A.1。 4.11复硝酚钠标准储备溶液：称取适量的2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准 1 GB/T37500—2019 品，用甲醇配制成各个标准物质浓度为2000mg/L的标准储备溶液 4.12复硝酚钠标准溶液：准确移取适量的复硝酚钠标准储备溶液（4.11），用甲醇稀释成200mg/L的 复硝酚钠标准溶液。 4.132，4-D标准储备溶液：称取适量的2，4-D标准品，用甲醇配制成浓度为2000mg/L的标准储备 溶液。 的2,4-D标准溶液。现用现配。 4.15脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准储备溶液：称取适量的脱落酸、茶乙酸、氯吡脲、烯效唑标准 品，用甲醇配制成浓度为4000mg/L的标准储备溶液 4.16脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液：准确移取适量的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑 标准储备溶液（4.15），用甲醇配制成浓度为400mg/L的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶 液。现用现配。 浓度为2000mg/L的标准储备溶液。 4.18吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸混合标准溶液：准确移取适量的吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸标准储备溶液 （4.17），用甲醇配制成浓度为200mg/L的吲哚-3-乙酸、哚丁酸混合标准溶液。现用现配 5仪器与设备 5.17 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（PDA）。 5.2色谱数据处理机。 5.3微量注射器：50uL 5.4高速离心机：最高转速不低于4000r/min。 5.5漩涡混合器。 5.6超声波清洗器。 5.7电子天平：精度0.1mg。 5.8金属试验筛：0.5mm。 5.9 有机相微孔滤膜：0.22μm。 6测定步骤 6.1样品制备 固体样品应粉碎至全部过0.5mm试验筛，待用。液体样品混匀后直接称量。 6.2试液提取 1min，超声提取30min后冷却至室温，用甲醇定容，高速离心10min，取1mL上清液过0.22μm有机 相滤膜，待测。 6.3高效液相色谱参考条件 6.3.1复硝酚钠色谱参考条件如下： a）色谱柱：250mmX4.6mm（内径）不锈钢柱，内装Atlantis?Ts、5.0μm填充物（或具有同等效 果的色谱柱)； 2 GB/T 37500—2019 b) 流动相：甲醇（4.2）十0.1%甲酸溶液（4.7）=55十45（体积比），经滤膜过滤，并进行脱气； c) 流速：0.8mL/min; d) 柱温：35℃； 检测波长：254nm； e) f) 进样量：10μL。 6.3.2 2，4-D色谱参考条件如下： a) 色谱柱：250mmX4.6mm（内径）不锈钢柱，内装RP18.5.0μm填充物（或具有同等效果的色 谱柱)； b) 流动相：乙睛（4.3）十乙酸铵溶液（4.8）=60十40（体积比）； c) 流速：0.8mL/min； d) 柱箱温度：35℃； e) 检测波长：283nm； f) 进样量：10μL。 6.3.3 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲和烯效唑色谱参考条件如下： a) 色谱柱：250mm×4.6mm（内径）不锈钢柱，内装RPi8、5.0μm填充物（或具有同等效果的色 谱柱）； b) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表1； c) 流速：1.0mL/min； d) 柱温：室温； e) 检测波长：氯吡脲、烯效唑、脱落酸最佳检测波长为258nm，萘乙酸最佳检测波长为280nm； f) 进样量：10μL。 6.3.4 吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸色谱参考条件如下： a) 色谱柱：250mmX4.6mm（内径）不锈钢柱，内装RPi8、5.0um填充物（或具有同等效果的色 谱柱)； b) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表2； c) 流速：1.0mL/min； d) 柱温：室温； e) 检测波长：280nm； f) 进样量：10μL。 表1高效液相色谱条件 时间 流动相[甲醇（4.2)] 流动相[0.1甲酸溶液（4.7)] min % % 0 30 70 7.0 45 55 13.0 55 45 18.0 80 20 26.0 10 90 26.1 30 70 33.0 30 70 3