ICS 71.040.30 G 66 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 32226—2015 果糖二磷酸钠（FDP）含量测定用 固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂 Specific solid enzyme (ALD, TIM, GDH)reagent for determination of fructose diphosphate (FDP) 2015-12-10发布 2016-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32226—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。 本标准起草单位：中国测试技术研究院、北京众宜隆润科技有限公司。 本标准起草人：谭和平、赵军、周李华、张莉莉、孙登峰、王晓平、叶德萍。 I GB/T32226—2015 果糖二磷酸钠（FDP）含量测定用 固体复合酶（ALD、TIM、GDH）试剂 1范围 本标准规定了果糖二磷酸钠（FDP)含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂的技术要求、试 验方法、检验规则、标志、包装和贮存。 本标准适用于果糖二磷酸钠（FDP)含量测定用固体复合酶（ALD、TIM、GDH)试剂。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9721化学试剂分子吸收分光光度法通则（紫外和可见光部分） GB15346化学试剂包装及标志 GB 19489 实验室生物安全通用要求 HG/T3921.化学试剂采样及验收规则 JJF1070 定量包装商品净含量计量检验规则 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 固体复合酶 每solidenzyme 果糖二磷酸钠含量测定用的复合酶试剂，含醛缩酶（ALD）、磷酸丙糖异构酶（TIM)和甘油磷酸脱 氢酶（GDH）的复合酶试剂。 3.1.2 固体复合酶活力 solid enzyme activity 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ALD：醛缩酶 ALD、TIM、GDH：固体复合酶 DAN：氧化型辅酶I FDP：果糖二磷酸钠 GDH：甘油磷酸脱氢酶 NADH：还原辅酶I 1 GB/T32226—2015 TIM：磷酸丙糖异构酶 4技术要求 4.1组成 本固体复合酶由醛缩酶（ALD）、磷酸丙糖异构酶（TIM）、甘油磷酸脱氢酶（GDH)组成。各组分的 重量份是：ALD（醛缩酶）20%～25%，TIM（磷酸丙糖异构酶）30%～40%，GDH（甘油磷酸脱氢酶） 30%~35%。 4.2 感官要求 本品为浅红色或类白色冻干粉，溶于三羟甲基氨基甲烷溶液（0.1mol/L，pH7.6)。 4.3 3理化要求 固体酶活力不小于40μg/（min·mg）。 4.4卫生要求 符合GB19489的要求。 5试验方法 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的三级（含三级）以十 的水。 5.1外观 肉眼观察为浅红色或类白色冻干粉。 5.2固体复合酶活力的测定 SAG 5.2.1原理 本产品是以动物肌肉为主要原料生产的含ALD、TIM和GDH的复合酶试剂。FDP在NADH的 存在下，先后经ALD、TIM和GDH的作用，一分子FDP能使两分子NADH氧化成DAN，引起 NADH反应前后在34Onm处吸光度发生变化，在线性范围内，通过测定NADH在单位时间内产生的 吸光度变化值，可计算固体复合酶的活力。 5.2.2试剂和溶液 5.2.2.1盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/LpH7.6）：取盐酸三乙醇胺18.6g，加水200mL溶解，加 3.7g乙二胺四乙酸二钠，溶解后，用2mol/L氢氧化钠（约18mL）调节pH至7.60，加水稀释至 后，用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH至7.6，加水稀释至250mL。过滤后4℃保 存，一周内使用。 5.2.2.2复合酶溶液：取固体复合酶0.1g加盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）溶解并稀释至10mL。重熔 漏斗过滤，4℃下保存。 5.2.2.3还原型辅酶I溶液：取还原型辅酶I6.5mg，加盐酸三乙醇胺缓冲液溶解，并稀释至50mL。 2 GB/T32226—2015 5.2.2.4果糖二磷酸钠溶液：取果糖二磷酸钠0.3g（按无水物计算），用水溶解并稀释至10mL。 5.2.3仪器和设备 紫外-可见分光光度法应符合GB/T9721的规定。 5.2.4分析步骤 取两只石英吸收皿，一只加2.99mL还原型辅酶I溶液和10L果糖二磷酸钠溶液，作为样品池； 另一只加2.99mL盐酸三乙醇胺缓冲液和10uL果糖二磷酸钠溶液，作为空白池，摇匀，静置5min，在 340nm波长处测定吸光度。向样品池中加入40μL复合酶溶液，在20℃～25℃立即摇勾并准确记 时，于1min，2min，3min，4min，5min分别测定吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，取近 似直线部分的斜率（即平均每分钟吸收度的差值△A）。重复测定2次，取平均值。 固体复合酶的活力按式（1)计算： △A 406.06 X1000 X3X 6.29X103 2 X= .(1) W 式中： X 固体复合酶的活力，单位为微克每毫克（μg/mg）； AA 平均每min吸收度的差值； 3 反应溶液体积，单位为毫升（mL）； 406.06 果糖二磷酸钠三钠盐的相对分子质量（C.HnNasOi2P2）； 1000 毫克转化为微克，单位为微克（ug）； 6.29X103 还原型辅酶I（DPNH)的摩尔吸收系数； 2 果糖二磷酸钠反应系数； W 加人样品池中的酶溶液质量，单位为毫克（mg）。 5.3净含量 按JJF1070执行。 6检验规则 6.1 组批抽样 按HG/T3921的规定进行采样。 6.2 出厂检验 6.2.1出厂检验项目包括外观、酶活力。 6.2.2产品出厂前，应由生产厂的质检部门负责按本标准规定逐批进行检验。符合标准要求，并签署 质量合格证的产品方可出厂。 6.3型式检验 6.3.1在出厂检验合格的成批产品中随机抽取Vn+1（n表示产品数量），进行型式检验 6.3.2型式检验项目为全项检验，包括外观、酶活力。但有下列情况之一时，也应进行型式检验： a）产品正常生产时，一季度进行一次； b）生产工艺、设备、原料有较大改变，可能影响产品质量时； 3