ICS65.020.01 B 16 中华人民共和国国家标准 GB/T 36823—2018 首宿籽蜂检疫鉴定方法 Detection and identification of Bruchophagus roddi Gussakovskiy 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 36823—2018 目 次 前言 1范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 首籽蜂基本信息 方法原理 5 仪器和用具 6 6.1仪器设备 6.2 实验用具 试剂 7 实验室鉴定 8.1 样品制备 8.2 虫样分离 8.3 镜检 形态学鉴定 9.1 广肩小蜂科形态鉴定特征 9.2 种子广肩小蜂属形态鉴定特征 9.3 首籽蜂形态特征 9.4 卵 9.5 幼虫 9.6 蛹 10 结果评定· 11 标本和样品保存 附录A（资料性附录） 首猎籽蜂的生物学信息 附录B（规范性附录） 首籽蜂与其近似种检索表 附录C（规范性附录） 首籽蜂与其近似种形态特征图 10 参考文献 13 GB/T36823—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、河北省黄骅市农业局。 本标准主要起草人：张红英、季宏铁、张建成、刘浩升、林晓佳、黄芳。 Ⅲ GB/T368232018 首籽蜂检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了首籽蜂（BruchophagusroddiGussakovskiy）的实验室检测和形态特征鉴定方法。 本标准适用于首猎籽蜂的检疫和鉴定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T20478—2006植物检疫术语 3术语和定义 GB/T20478界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 头部head 头部扁圆形，头顶一对复眼和三个单眼，单眼成三角形排列。 3.2 触角 antenna 触角着生在触角窝，由柄节、梗节和鞭节构成。鞭节第一节呈环状，称作环状节。端部三节膨大，称 作棒节，其余鞭节称作索节。 3.3 胸部 mesosoma 指前胸、中胸、后胸和并胸腹节总称。前胸由前胸背板、颈片和领片组成。中胸是中胸盾片、三角片 和小盾片的复合体，中胸盾片由深陷的盾纵沟划分为中区和两侧区 3.4 胸腹侧片 prepectus 沿中胸的前侧片前缘的区域。 3.5 并胸腹节 propodeum 膜翅目细腰亚目昆虫所特有，由腹部第一节与后胸一部分愈合而成。 [SN/T2471—2010,定义2.2] 3.6 腹部 metasoma 除去形态学上原始的第一腹节（即与胸部合并的并胸腹节）的其他腹节的总称 3.7 产卵器 号ovipositor 雌虫用于产卵的瓣状构造，有时伸出体外。 1 GB/T36823—2018 3.8 负瓣片 valvifers 产卵器的基板。由生殖肢的基肢节所衍生，具有产卵瓣，包括第8腹节第1负瓣片和第9腹节的第 2负瓣片。 3.9 感觉孔 Lsensorypore 表皮中的细小凹陷，每个凹陷表示一个感觉器官的位置。 4首籽蜂基本信息 中文名：首籽蜂。 中文别名：首广肩小蜂。 学名：Bruchophagus roddi Gussakovskiy。 英文名：Alfalfaseed chalcid。 分类地位：膜翅目Hymenoptera、广肩小蜂科Eurytomidae、种子广肩小蜂属Bruchophagus。 传播途径：幼虫和蛹隐匿于寄主的种子中随运输远距离传播 近似种：百脉根籽蜂Bruchophagusplatypterus（Walker）、红花三叶草籽蜂Bruchophagusgibbus （Boheman）。首籽蜂的生物学信息参见附录A。 5方法原理 将样品中略微扁平、颜色较深或在饱和食盐水中漂浮的种子在体视显微镜下开种皮，发现小蜂后 进行形态特征的观察。在蒸馏水中解剖虫体腹部，找出外生殖器进行形态特征的观察。成虫及雌雄虫 外生殖器特征相同鉴定为首籽蜂。 6 仪器和用具 6.1 仪器设备 6.1.1 体视显微镜：具有测量功能，精确到0.01mm。 6.1.2 电子天平：感量0.001kg。 6.2 实验用具 6.2.1 烧杯：1000mL，2000mL。 6.2.2 可封口塑料袋：9号，280mm×200mm。 6.2.3放大镜：10×。 6.2.4培养皿:90mm。 6.2.5其他：标签、玻璃棒、解剖针、镊子、小毛笔、指形管、昆虫针、白瓷盘、漏斗、滤纸、标本瓶。 7试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 饱和食盐水：1000mL蒸馏水加人360g氯化钠，搅拌至全部溶解。 2 GB/T36823—2018 8实验室鉴定 8.1 样品制备 二分之一至四分之三（较少样品时）作为试验样品，称取其质量并记录，每份试验样品不少于1kg，剩余 的平均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足1kg的全部检测 8.2虫样分离 8.2.1剖粒检验 特征的种子挑出，蒸馏水浸泡膨胀软化后置于体视显微镜下，用解剖针检查每粒种子，解剖出籽内幼虫、 蛹或成虫。 8.2.2比重检验 取一份平均样品，先放在白瓷盘内，用手持放大镜观察种子外表是否有虫体，特别是隔年种子可以 发现死成虫或其他残体。然后，把样品放在的干净的烧杯中，倒人饱和食盐水溶液，搅拌均匀后静置 30min，取出漂浮在盐水上面的籽粒，剩余样品再用饱和食盐水重复浸泡一次，取出漂浮籽粒。把两次 漂浮籽粒放在蒸馏水中洗涤后浸泡软化后置于体视显微镜下用解部针检查每粒种子，解部出籽内幼虫、 或成虫。 8.3镜检 将8.2.1或8.2.2中分离获得的可疑虫体置于体视显微镜下，观察形态特征，根据形态学鉴定特征 并结合近似种的区别进行种类鉴定 9形态学鉴定 9.1广肩小蜂科形态鉴定特征 广肩小蜂科形态鉴定特征： 前胸背板发达，明显宽大，长方形； a) b) 触角11节13节，多为12节，着生在颜面中部；触角洼深； 中胸背板常具有粗而密的顶针状刻点，盾纵沟深而完全； d）雌蜂具短腹柄，腹部侧扁，末端延伸成犁头状，产卵管略伸出。 9.2 2种子广肩小蜂属形态鉴定特征 种子广肩小蜂属形态鉴定特征： 头部比胸部稍宽，颊长，几乎与复眼纵径等长； a) b) 触角着生于颜面中部，雌蜂触角索节稍呈棒状，具浓密绒毛，5节，棒节3节；雄蜂索节4节，棒 节3节，触角索节具4个小柄，有轮生的长绒毛； c） 小盾片卵圆形，凸起，与中胸背板等长； (p 胸腹侧片刀形，背面部分光滑且有光泽； e） 并胸腹节几乎垂直，平滑，具浓密且微小的网状皱，无中纵沟； 3 GB/T36823—2018 f) 雌蜂腹部卵圆形，两侧稍紧缩，近末端逐渐尖锐，小于或等于胸部，各背板通常等长，产卵器稍 突出； 雄蜂腹部圆形，腹柄长大于宽。 g） 9.3 3首籽蜂形态特征 9.3.1首籽蜂成虫形态鉴定特征 首籽蜂成虫形态鉴定特征（见附录B和附录C中图C.1)： a） 体黑色；雌蜂体长（1.98士0.22）mm，雄蜂体长（1.56士0.10）mm； b) 并胸腹节几乎垂直，中部具细密的网状纹：基部有时具不多且短的皱褶： c） 前翅缘脉、后缘脉和痣脉几乎彼此等长； (P 雌蜂腹部腹面平坦，最后一节背板较平，不向上扬起； e) 雌蜂腹部卵圆形，两侧稍紧缩，近末端渐尖，除末端有绒毛外，各节光滑； 雄蜂腹部近圆形，长明显小于胸部；各节光滑，无毛。 9.3.2首宿籽蜂成虫生殖器形态鉴定特征 首籽蜂成虫生殖器形态鉴定特征（见附录B中表B,1和附录C中图C.2)： a）雌蜂外生殖器形态鉴定特征： 1）产卵器外板与第8节背板融合的部分轻度硬化，硬化的区域集中围绕在第8节背板毛生 长的区域； 2）斤 产卵器外板膜质；第8节背板具有两行毛，44根～64根； 3）产卵器鞘长250um~330μm； 4）产卵器鞘上的毛聚集在端部，6根16根，从聚集的端部逐渐向产卵鞘韧带区域延伸。 b）雄蜂外生殖器形态鉴定特征： 1）阳茎长240μm~315μm； 2）背面观阳茎感觉孔4个，成对或分散；一对感觉孔间距较近，位于条纹区，但条纹不超过第 2感觉孔。下方的另一对感觉孔间距较远； 3） 9.4卵 卵长椭圆形，长0.17mm～0.24mm，在体式显微镜下可见卵的一端稍尖，一端拉出一根丝状卵柄， 长0.30mm~0.52mm。卵透明且有光泽。 9.5幼虫 乳白色，肾形、无足、头部有一对褐色上颚，其内缘有1个三角形的小齿。根据幼虫头壳宽度可将其 分为4个龄期，其中，一龄幼虫头壳宽度范围为0.148mm~0.216mm，平均为0.182mm；二龄幼虫头 壳宽度范围为0.227mm~0.295mm，平均为0.261mm；三龄幼虫头壳宽度范围为0.306mm~ 0.386mm，平均为0.346mm；四龄幼虫头壳宽度范围为0.397mm~0.499mm，平均为0.448mm。 9.6蛹 裸，平均体长1.83mm士0.02mm，初期乳白色，1d～2d后体色变为乳黄色，后逐渐变黑，复眼 变红色，近羽化时除复眼外全部黑色。 4