ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 36873—2018 原种鸡群禽白血病净化检测规程 Code of practice for detection of avian leukosis infection in chicken pedigree breeder flock 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 36873—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本标准起草单位：山东农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、安徽科技学院、扬州大学、华南农 业大学 本标准主要起草人：赵鹏、崔治中、李卫华、张训海、秦爱建、叶建强、曹伟胜 1 GB/T36873—2018 原种鸡群禽白血病净化检测规程 1范围 本标准规定了原种鸡群禽白血病净化检测规程。 本标准适用于原种鸡群实施针对禽白血病的净化 2 规范性引用文件 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T26436一2010禽白血病诊断技术 NY/T680—2003禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 原种鸡群pedigreebreederflock 进行选育种的原始禽群。 3.2 动物疫病净化 animaldiseaseeradication 在一个养殖场或指定区域内，通过持续检测和监测发现患病动物或带毒动物，并通过淘汰带毒动物 以实现根除某种动物疫病的过程。 4检测规程 4.1出壳维鸡胎粪的检测与淘汰 4.1.1样品的收集 在灭菌的1.5mL离心管中每管预先放人0.5mL灭菌的磷酸缓冲盐溶液（phosphatebuffersaline， PBS,0.01mol/L，pH7.4)（PBS配制操作规范见附录A），或采用符合NY/T680—2003的商品化试剂 盒专用稀释液，将离心管对准鸡肛门处轻轻按压维鸡腹部将胎粪挤入1.5mL离心管中。 4.1.2样品的处理与检测 将装有胎粪的1.5mL离心管在涡旋震荡仪上充分震荡混匀，然后放于液氮中迅速冷冻，冷冻 2min后取出置于37℃水浴锅中融化，然后将离心管在涡旋震荡仪上再次充分震荡混匀。如此反复冻 融两次后将离心管置于台式离心机中，12000g离心1min，离心后取上清，应按照NY/T680—2003 或采用符合NY/T680—2003的商品化试剂盒检测胎粪中禽白血病病毒p27抗原。 1 AG GB/T36873—2018 4.1.3检测后的处理 同一只（羽)母鸡所产的维鸡中，只要有一只雏鸡胎粪检测为禽白血病病毒p27抗原阳性则该纸袋 中所有同胞雏鸡及其对应母鸡均视为禽白血病病毒阳性，阳性鸡不再列为育种选育个体，应淘汰做无害 化处理。阴性鸡立即运送至育维舍中饲养。 4.1.4出壳期间注意事项 出壳期间操作注意事项参见附录B。 4.2 2育雏后期的检测与淘汰 4.2.1鸡群全血病毒分离 在育维结束前10d左右，对按照育种标准选定的维鸡逐一无菌采集抗凝血，应按照GB/T26436 2010接种DF-1细胞进行病毒分离，培养7d～9d后取细胞上清，应按照NY/T680—2003或采用符合 NY/T680一2003的商品化试剂盒检测细胞上清中禽白血病病毒p27抗原，若禽白血病病毒p27抗原 为阳性则判定该维鸡为禽白血病病毒阳性鸡（全血病毒分离操作规范见附录C）。 4.2.2检测后的处理 经病毒分离为阳性的维鸡不再列为育种选育个体，应淘汰做无害化处理。对检测为阴性的选留后 备种鸡应维持小群饲养或单笼饲养， 4.2.3育维期间注意事项 育维期间操作注意事项参见附录D。 4.3 3开产初期的检测与淘汰 4.3.1母鸡的检测 每只（羽）母鸡逐一无菌采集抗凝血，应按照GB/T26436一2010接种DF-1细胞进行病毒分离，培 养7d～9d后取细胞上清，应按照NY/T680一2003或采用符合NY/T680一2003的商品化试剂盒检 测细胞上清中禽白血病病毒p27抗原，若禽白血病病毒p27抗原为阳性则判定该母鸡为禽白血病病毒 阳性鸡（全血病毒分离操作规范见附录C）。 4.3.2公鸡的检测 每只（羽）公鸡逐一无菌采集抗凝血，应按照GB/T26436一2010接种DF-1细胞进行病毒分离，培 养7d～9d后取细胞上清，应按照NY/T680—2003或采用符合NY/T680—2003的商品化试剂盒检 测细胞上清中禽白血病病毒p27抗原，若禽白血病病毒p27抗原为阳性则判定该公鸡为禽白血病病毒 阳性鸡（全血病毒分离操作规范见附录C）。同时对每只（羽）公鸡逐一采集新鲜精液接种DF-1细胞进 定该公鸡为禽白血病病毒阳性鸡。 4.3.3检测后的处理 经病毒分离为禽白血病病毒阳性种鸡不再列为育种选育个体，应淘汰做无害化处理。对检测为阴 性的选留后备种鸡维持单笼饲养。 2 GB/T 36873—2018 4.4留种前的检测与淘汰 4.4.1母鸡的检测 每只（羽）母鸡逐一无菌采集抗凝血，应按照GB/T26436一2010接种DF-1细胞进行病毒分离，培 养7d～9d后取细胞上清，应按照NY/T680一2003或采用符合NY/T680一2003的商品化试剂盒检 测细胞上清中禽白血病病毒p27抗原,若禽白血病病毒p27抗原为阳性则判定该母鸡为禽白血病病毒 阳性鸡（全血病毒分离操作规范见附录C)。 SAG 4.4.2公鸡的检测 每只（羽）公鸡逐一无菌采集抗凝血，应按照GB/T26436一2010接种DF-1细胞进行病毒分离，培 养7d～9d后取细胞上清，应按照NY/T6802003或采用符合NY/T680一2003的商品化试剂盒检 测细胞上清中禽白血病病毒p27抗原，若禽白血病病毒p27抗原为阳性则判定该公鸡为禽白血病病毒 阳性鸡（全血病毒分离操作规范见附录C）。同时对每只（羽）公鸡逐一采集新鲜精液接种DF-1细胞进 行病毒分离（公鸡精液病毒分离操作规范见附录E），公鸡的血浆和精液任何一方检测结果为阳性即判 定该公鸡为禽白血病病毒阳性鸡。 4.4.3检测后的处理 经病毒分离为禽白血病病毒阳性种鸡不再列为育种选育个体，应淘汰做无害化处理。对检测为阴 性的选留后备种鸡维持单笼饲养。 4.5种蛋的选留和孵化 按照4.14.4所列检测规程淘汰阳性鸡后，每只阴性母鸡仅选用来源于1只阴性公鸡的精液进行 人工授精。母鸡所产种蛋均一一标号并与母鸡编号对应，将来自于同一只母鸡的种蛋置于带有母鸡编 号的孵化纸袋或纸盒中，放入已消毒的孵化器中孵化（孵化期间操作注意事项参见附录F）。 4.6不同世代的持续检测与净化 按照4.14.5检测规程净化后孵出的维鸡作为净化后第二世代鸡，继续按照4.1～4.5检测规程实 施第二世代的检测和净化，后续世代按此检测规程继续循环进行。 5净化周期启动与终止 5.1检测节点的选择 缩短净化周期。 5.2净化效果评估 化试剂盒检测蛋清中禽白血病病毒p27抗原，若禽白血病病毒p27抗原全部为阴性则判定为达到禽白 血病净化状态，若阳性率高于1%则判定为未达到净化状态，若阳性率介于01%则需要对原种鸡群单 系随机选取50只（羽）鸡开展病毒分离进行复核检测，若病毒分离全部为阴性则判定为达到禽白血病净 化状态，若病毒分离出现阳性则判定为未达到禽白血病净化状态。 3 GB/T36873—2018 5.3 实现净化后检测比例的调整 按照5.2所列要求判定达到禽白血病净化状态的原种鸡群建议无需再按照4.1～4.5全部检测程序 按照4.1～4.5推荐的净化检测规程重新实施净化 净化过程中注意事项 6.1 种禽场生物安全 SA 6.1.1原种鸡群应有相对隔离的地理位置，要远离其他鸡群 6.1.2应执行全进全出制度，原种鸡群需要物品和人员与外界的交流程度越低越好。 6.1.3原种鸡群工作人员应固定化，避免其他鸡群的饲养员进入正在实施净化的原种鸡群中工作。 6.1.4运送物品的车辆进出时以及人员出入均应执行消毒制度。 6.1.5原种鸡群应在鸡舍设立严密而有效的防鸟网或其他的防鸟措施，并定期检查防鸟网或其他防鸟 措施的维护状况和应用效果。 6.2 弱毒疫苗的使用 外源病毒污染，原种鸡群饲养企业需购买检测合格的市售商品化弱毒疫苗，购买疫苗时向生物制品企业 索取该批次产品的检测报告并保留疫苗样品备查。 4 GB/T36873—2018 附录A （规范性附录） 磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH7.4）配制操作规范 A.1在800mL蒸馏水中分别加人无水NaCl8g，无水KCl0.2g，无水KH,PO.0.27g，无水 NazHPO,1.42g，搅拌使其充分溶解。 A.2 2用HCI调节溶液的pH值至7.4，加蒸馏水定容至1L，高压蒸汽灭菌后置于室温保存 SZIC 5