ICS 71.100.70 Y 42 中华人民共和国国家标准 GB/T 35954—2018 化妆品中10种美白祛斑剂的测定 高效液相色谱法 Determination of 1o whitening and freckle-removing components in cosmetics-High performance liquid chromatography 2018-09-01实施 2018-02-06发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35954—2018 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口。 本标准起草单位：深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、 本标准主要起草人：陈沛金、涂小珂、张毅、肖锋、康海宁、林黎、沈金灿、罗耀。 GB/T35954—2018 化妆品中10种美白祛斑剂的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中10种美白祛斑剂（抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、β-熊果苷、曲酸、烟 色谱测定方法的试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、回收率与精密度、允许差等内容 本标准适用于水基、乳液、膏霜、凝胶、蜡基、粉基类等化妆品中10种美白祛斑剂的测定 本标准方法检出限与定量限参见附录A中表A.1。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品以磷酸二氢钾溶液为提取溶剂，水基样品、水包油样品直接超声提取，油包水样品、蜡基、粉基 样品经二氯甲烷溶解分散后再加提取溶剂超声提取，离心，经0.22um的水系滤膜过滤，溶液注入配有 二极管阵列检测器（DAD的液相色谱仪检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇：色谱纯。 4.2二氯甲烷：色谱纯。 4.3氢氧化钾溶液（100g/L）：称取10g（精确至0.001g）氢氧化钾固体，用水溶解并定容到100mL。 4.4磷酸二氢钾溶液（0.02mol/L，pH6.0）：称取磷酸二氢钾（色谱级）2.722g，用水溶解并转移至 1000mL容量瓶中，定容到刻度。用氢氧化钟溶液（4.3）调pH至6.0。 4.5标准样品/物质：纯度不小于95%。抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、β-熊果苷、曲酸、烟酰胺、 称、CAS登录号、分子式、结构式、相对分子质量参见附录B中表B.1。 注：抗坏血酸磷酸酯盐（主要是镁盐和钠盐)在液相色谱上均是以抗坏血酸磷酸酯形式被检出，本方法建议选择抗 坏血酸磷酸酯镁作为标准物质。 4.6标准储备溶液：准确称取适量标准品（4.5）用水溶解分别配制成浓度为5000mg/L的标准储备溶 液，4-丁基间苯二酚先用0.5mL甲醇溶解后再用水配制成标准储备溶液，于一18℃下保存，有效期 1个月。 4.7混合标准储备溶液：分别移取5mL标准储备溶液（4.6）至100mL的容量瓶中，用磷酸二氢钾溶 1 GB/T35954—2018 液（4.4)定容至刻度，转移至聚丙烯管中于一18℃下保存，有效期1周。 4.8混合标准工作溶液：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.4mL.0.8mL、2.0mL、4.0mL混合标准储备溶 液（4.7），置于10mL容量瓶中，用磷酸二氢钾溶液（4.4）定容至刻度。混匀。现用现配。标准曲线化合 物质量浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器（DAD)。 5.2离心机：>9500r/min。 5.3分析天平：感量为0.0001g和0.001g。 5.4酸度计。 5.5涡旋混合器。 5.6超声波清洗器。 5.7 7水系微孔滤膜：0.45μm。 6分析步骤 6.1样品处理 6.1.1水基、水包油样品的制备 称取0.5g（精确至0.001g）样品于50mL具塞比色管中，加入30mL磷酸二氢钟溶液（4.4），涡旋 振荡至样品完全分散，超声提取20min，转移至50mL容量瓶中，用磷酸二氢钾溶液（4.4）定容至刻度。 混合均勾后取适量溶液放人离心管中，于9500r/min转速离心5min，取离心后的上层水相溶液，经 0.45μm水系滤膜过滤，滤液待测定。 6.1.2油包水、蜡基类、粉状类样品的制备 称取约0.5g（精确至0.001g）样品于50mL具塞离心管中，加入2.5mL二氯甲烷（4.2），涡旋振荡 至样品完全分散（如有少量样品不分散可超声至完全分散），加入20mL磷酸二氢钾溶液（4.4），超声提 取20min，涡旋振荡1min，9500r/min转速离心5min，移取上清至50mL容量瓶中.再加入20mL 磷酸二氢钾溶液（4.4），涡旋振荡1min，9500r/min转速离心5min，合并上清液至50mL容量瓶中， 用磷酸二氢钾溶液（4.4）定容至刻度。混合均匀后取适量溶液经0.45um水系滤膜过滤，滤液待测定。 注1：被测物含量小于0.025%的试样可适当增大取样量。 注2：取样量在1g～2g时，按以上步骤进行样品制备；取样量大于2g时，适当增加提取溶剂体积至50mL~ 100mL,并增加提取溶剂萃取次数至3~5次 6.2 测定步骤 6.2.1色谱条件 液相色谱分析条件参考如下： a） 色谱柱：EclipseXDB-C18，250mmX4.6mm（i.d），5μm，或其他效果等同的色谱柱； b) 流动相：A：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH6.0),B:甲醇； 流速：1.0mL/min； d) 柱温：25℃； 进样量：10μL； 2 GB/T 35954—2018 f）检测波长：230nm、250nm； g) 梯度洗脱条件见表1。 表1液相色谱流动相及参考分离条件 流动相 时间/min A/% B/ % 0 95 5 3 95 5 8 80 20 14 10 06 18 10 90 25 95 5 6.2.2 标准曲线的绘制 取混合标准工作溶液（4.8）按色谱条件（6.2.1)进行测定，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，标准溶液质 量浓度（X，mg/L）为横坐标绘制标准工作曲线。10种美白祛斑剂标准溶液液相色谱图参见附录C中 图 C.1。 6.2.3试样测定 依次取待测样品溶液（6.1）注人液相色谱仪，按色谱条件（6.2.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间 和峰面积。根据标准曲线求得样品溶液中目标化合物的含量。试样溶液中的被测物响应值应在标准曲 线的线性范围之内。超过线性范围的试样可用磷酸二氢钾溶液（4.4）适当稀释后进行测定。 注：为保证试样定量的准确性，尽量在12h内完成测试过程。 6.2.4定性确证 液相色谱仪对样品进行定性测定。样品测定时，如果检出被测美白祛斑剂色谱峰的保留时间与标 准品一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图与标准品的紫外吸收图相一致，可 初步确定该样品含有被测的美白祛斑剂。必要时，需要采用其他方法进行确认。 6.3空白试验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 6.4平行试验 按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。 7结果计算 试样中美白祛斑剂含量按下式计算： cI X V Xi= 1000×1000×m X 100X f 3 GB/T35954—2018 式中： X 样品中某一美白祛斑剂的质量分数，%； 测试溶液中某一美白祛斑剂的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)； Ci V; 一一样品定容体积，单位为毫升（mL）； 样品取样量，单位为克（g）； m f -样品浓度超过工作曲线后的稀释倍数 8 回收率与精密度 在添加浓度0.025%~0.5%的浓度范围内，回收率在87.9%~102%之间，相对标准偏差小于4% 9 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 4 GB/T35954—2018 附录A （资料性附录） 10种美白祛斑剂测定方法检出限与定量限 本标准方法检出限与定量限参见表A.1。 表 A.1 10种美白祛斑剂测定方法检出限与定量限 化合物 检出限/% 定量限/% 抗坏血酸磷酸酯镁 0.003 0.008 5 抗坏血酸葡糖苷 0.0025 0.0075 β-熊果苷 0.0167 0.025 曲酸 0.01 0.015 烟酰胺 0.005 0.010 3-0-乙基抗坏血酸 0.0025 0.007 5 甲氧基水杨酸钾 0.0025 0.0065 覆盆子酮葡糖苷 0.008 3 0.015 甘草酸二钾 0.01 0.02 4-丁基间苯二酚 0.005 5 0.01 注：检出限与定量限以取样量0.5g，定容体积50mL，进样量10μL计。 5