ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 34801—2017 脱氧核糖核酸酶活力检测方法 Determination of the activity of desoxyribonuclease 2017-11-01发布 2018-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T34801—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国标准化研究院、厦门市格灵生物技术有限公司、福建赛福食品检测研究所有 限公司、浙江工商大学、河北农业大学、合肥工业大学、河北省出入境检验检疫局、北京市食品科学研究 院、河北食品检验研究院、东营市标准化信息所、河南大学 本标准主要起草人：马爱进、陈智勇、黄秀娟、王彦波、孙纪录、郑磊、刘道亮、孙勇、云振宇、傅玲琳、 吴琦、赵琳、周魏、刘鹏、康文艺、宗学花。 1 GB/T 34801—2017 脱氧核糖核酸酶活力检测方法 1范围 本标准规定了脱氧核糖核酸酶活力检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。 本标准适用于生化试剂脱氧核糖核酸活力检测 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 3 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脱氧核糖核酸酶deoxyribonuclease；DNase 水解脱氧核糖核酸(DNA)中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶。 3.2 脱氧核糖核酸酶活力单位 ribonuclease activityunit 以浓度为0.15mg/mL的1.5mL小牛胸腺DNA为底物，在35℃且pH5.0的条件下，1min内使 反应液在260nm处的吸光度增加0.001所需要的酶量。 注：一个酶活力单位以U表示。 4原理 脱氧核糖核酸酶催化脱氧核糖核酸分解，降解产物在260nm波长下具有特征吸收峰，通过外标法 计算脱氧核糖核酸酶的活力。 5 5仪器设备及器具 5.14 恒温水浴槽：精度为0.1℃。 5.2 紫外-可见分光光度计：吸光度精确至0.001。 5.3pH计：精度为0.01。 5.4 1cm石英比色皿。 5.5电子天平：精度为0.0001g.0.01g或0.1g。 6 主要试剂 本方法所用试剂均为分析纯，除特殊说明外，实验用水均为GB/T6882规定的二级水。 1 GB/T34801—2017 6.10.1mol/L乙酸-乙酸钠(CH:COOH-CH;COONa,HAc-NaAc)缓冲液，pH5.0 称取8.2gNaAc，精确至0.01g.0.45g不含有结晶水的MgCl2，0.21g无水CaCl2溶于水中，缓慢 加入HAc调pH至5.0，混匀后定容至1000mL。 6.20.15mol/L氯化钠（NaCI)溶液 称取8.77gNaCl溶于水中，混匀后定容至1000mL。 6.3小牛胸腺脱氧核糖核酸 来源于小牛胸腺，含量≥98%。 7分析步骤 7.1王 环境要求 所有试验操作均应在洁净的无外源DNA酶环境中进行。 7.2试验溶液的制备 7.2.1小牛胸腺DNA溶液 称取小牛胸腺DNA0.015g，精确至0.0001g，溶于水中，使其溶液浓度为0.15mg/mL，现配现用。 7.2.2固体样品待测酶液制备 根据标称，称取固体待测样品适量，溶于水中，调节脱氧核糖核酸酶活力在10U/mg～200U/mg。 7.2.3液体样品待测酶液制备 7.3酶促反应 核糖核酸溶液1.5mL、水0.5mL与HAc-NaAc缓冲液1mL；检测管中依次加入小牛胸腺脱氧核糖核 测管，35℃土1℃恒温水浴反应时间为10min。 7.4分光光度分析 处测定对照管和检测管溶液的吸光度并记录记结果。 表1待测样液加样方法 项目 0号管 1号管 2号管 3号管 小牛胸腺DNA溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 水/mL 0.5 0.0 0.0 0.0 乙酸-乙酸钠缓冲液/mL 1.0 1.0 1.0 1.0 待测酶液/mL 0.0 0,5 0.5 0.5 2