ICS 71.100.70 Y 42 中华人民共和国国家标准 GB/T 34918—2017 化妆品中七种性激素的测定 超高效液相色谱-串联质谱法 Determination of 7 sexual hormones in cosmetics- Ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2018-05-01实施 2017-11-01发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T34918—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会（SAC/TC374)提出并归口。 本标准起草单位：深圳市计量质量检测研究院、中检华纳（北京）质量技术中心有限公司、中检联盟 （北京）质检技术研究院有限公司、国家日用小商品质量监督检验中心、深圳市容大生物技术有限公司、 深圳市金因生物技术有限公司、浙江艳庄化妆品有限公司、无限极（中国）有限公司、完美（中国）有限公 司、上海相宜本草化妆品股份有限公司、广东丹姿集团有限公司、广州市巧美化妆品有限公司、广东芭薇 生物科技股份有限公司、纳爱斯集团有限公司、义乌市产品（商品）质量监督检验研究院。 本标准主要起草人：赵彦、林志惠、幸苑娜、冯岸红、陈茜、许鸿辉、杨平顺、葛峰、孙红梅、刘德海、 姚松君、李晓敏、袁利文、吕智、毛勇进、张健、刘瑞学、段建军、韦顺文。 GB/T34918—2017 化妆品中七种性激素的测定 超高效液相色谱-串联质谱法 警示一一使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准的使用可能涉及到某些有危 险的材料，设备和操作，本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措 施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1范围 本标准规定了超高效液相色谱-串联质谱法测定水状、乳状、膏状、面膜、粉状等化妆品中七种性激 素（雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、睾酮、甲基睾酮、黄体酮）的原理、试剂、仪器设备、样品处理、测定、 试验数据处理和实验报告等。 本标准适用于水状、乳状、膏状、面膜、粉状等化妆品中七种性激素的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用甲醇十乙睛（1十1，体积比）混合溶剂漩涡提取化妆品中的性激素，离心过滤后，加人氢氧化钠溶 液进行皂化反应，调节pH至6.5~7.5，经固相萃取小柱净化，用反相超高效液相色谱-串联质谱法测定， 内标法定量。 4试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 GB/T6682规定的一级水。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙：色谱纯。 4.42 乙酸铵。 4.5 5氢氧化钠。 4.6 浓盐酸。 4.7 4.8 乙酸铵溶液（0.5mmol/L）：称取38.5mg乙酸铵（4.4），用水（4.1）溶解定容至1L。 4.9 氢氧化钠溶液（20g/L）：称取20.0g氢氧化钠（4.5），用水（4.1）溶解定容至1L。 4.10 盐酸溶液（10mol/L）：量取833mL的浓盐酸（4.6），用水（4.1）溶解定容至1L。 4.11 盐酸溶液（1mol/L）：量取100mL的10mol/L盐酸溶液（4.10）,用水（4.1）溶解定容至1L。 1 SAG GB/T34918—2017 4.12 盐酸溶液（0.1mol/L）：量取100mL的1mol/L盐酸溶液（4.11），用水（4.1)溶解定容至1L。 4.1310%乙睛水溶液（体积比）：量取100mL乙睛（4.3）和900mL水（4.1)充分混匀后制得 4.14 纤维素滤纸。 4.15pH试纸：范围5.5~9.0。 4.16HLB固相萃取小柱或相当者：150mg。 4.17样品过滤器：有机膜，孔径0.22um。 D2、甲基睾酮D3为同位素内标，纯度不小于99.0%。7种标准品和2种同位素内标的英文名称、CAS 登录号、分子式、化学结构图参见附录A。 4.19内标储备液（100μg/mL）：准确称取同位素内标（4.18）各10.0mg，用甲醇（4.2)分别溶解定容至 100.0mL，于（一4士1）℃下密封保存，可在一年内稳定。 4.20标准储备液（1mg/mL）：准确称取标准品（4.18）各10.0mg，用甲醇（4.2）分别溶解定容至 10.0mL，于（一4士1)℃下密封保存，可在一年内稳定。 4.21混合内标使用液（1μg/mL）：准确量取内标储备液（4.19）各1.00mL，用甲醇（4.2）定容于 100.0mL，于（一4士1)℃下密封保存。 4.22标准混合工作溶液：根据需要，用甲醇稀释，将各标准储备液（4.20）配制成0.025ug/mL、 0.050ug/mL、0.20μg/mL0.40g/mL、0.80μg/mL系列浓度的标准曲线溶液后，各取1.00mL置于 进样瓶中，并加人50uL混合内标使用液（4.21），制得标准混合工作溶液，标准混合工作溶液中各浓度 梯度含各同位素内标0.05μg。 5仪器设备 5.1超高效液相色谱-串联质谱联用仪（配ESI源）。 5.2分析天平：精度0.1mg。 5.3涡旋混合器。 5.4离心机：转速10000r/min；容量10mL，50mL。 5.5固相萃取装置。 6样品准备 6.1提取 称取0.2g样品（精确至0.001g）于15mL具塞离心管中，准确加入2mL甲醇十乙（1十1，体积 比）（4.7），涡旋震荡使样品溶液达到均质状态，10000r/min离心10min，吸取上层清液至另一50mL 具塞离心管中，下层样品用2mL甲醇十乙睛（1十1，体积比）（4.7）重复提取一次，合并两次提取液后， 加入35mL氢氧化钠溶液（20g/L）（4.9），混匀，10000r/min离心10min后，经纤维素滤纸（4.14）过滤 后，分别加人10mol/L盐酸溶液（4.10）、1mol/L盐酸溶液（4.11)和0.1mol/L盐酸溶液（4.12），调节清 液pH值至6.5～7.5之间，待固相萃取小柱净化 6.2净化 HLB固相萃取小柱（4.16）接上固相萃取装置（5.5），小柱分别用5mL甲醇（4.2）、10mL水（4.1)进 行活化。将待净化的样品溶液倒人小柱中，待样品溶液完全流出后，加入10mL10%乙睛水溶液 （4.13）清洗小柱，弃去全部淋出液。在负压下，减压抽干1min，最后用5mL甲醇（4.2）洗脱，收集样品 洗脱液于15mL离心管中，转移样品洗脱液至5mL具塞比色管，用甲醇（4.2）定容至刻度液。经样品 2