ICS 07.080 B 20/39 中华人民共和国国家标准 GB/T 34222—2017 核糖核酸酶活力检测方法 Determination of the activity of ribonuclease 2018-04-01实施 2017-09-07发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T34222—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国标准化研究院、厦门市格灵生物技术有限公司、福建赛福食品检测研究所有 限公司、浙江工商大学、河北农业大学、合肥工业大学、河北省出入境检验检疫局、泉州市标准化研究所、 北京市食品科学研究院、河北食品检验研究院、东营市标准化信息所、河南大学。 本标准主要起草人：马爱进、陈智勇、黄秀娟、王彦波、孙纪录、郑磊、刘道亮、林清山、孙勇、云振宇、 傅玲琳、吴琦、赵琳、周魏、刘鹏、康文艺、宗学花 1 GB/T 34222—2017 核糖核酸酶活力检测方法 1范围 本标准规定了核糖核酸酶活力检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶活力检测 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核糖核酸酶 每ribonuclease;RNase 水解核糖核酸（RNA)中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶。 3.2 核糖核酸酶活力单位 ribonucleaseactivity unit 以浓度为0.15mg/mL的1.5mL酵母RNA为底物，在50℃且pH5.0的条件下，1min内使反应 液在260nm处吸光度增加0.001所需要的酶量。 注：一个酶活力单位以U表示。 4原理 核糖核酸酶催化核糖核酸分解，降解产物在260nm波长下具有特征吸收峰，通过外标法计算核糖 核酸酶的酶活力。 5 仪器设备及器具 5.1 恒温水浴槽：精度为0.1℃。 5.2 2紫外-可见分光光度计：精度为0.001。 5.3pH计：精度为0.01。 5.4 1cm石英比色皿。 5.5电子天平：精度为0.0001g、0.01g或0.1g。 6 试剂 本方法所用试剂均为分析纯，除特殊说明外，实验用水均为GB/T6882规定的二级水。 1 GB/T 34222—2017 称取8.2gNaAc，精确至0.01g，溶于水中，缓慢加人HAc调pH至5.0，混匀后定容至1000mL。 6.2 2酵母核糖核酸 来源于圆酵母，含量≥98%。 7分析步骤 7.1 环境要求 所有试验操作应在洁净的无外源RNA酶环境中进行。 7.2试验液的制备 7.2.1酵母RNA溶液 称取酵母RNA0.015g，精确至0.0001g，溶于水中，使其溶液浓度为0.15mg/mL。 7.2.2固体样品待测酶液制备 7.2.3液体样品待测酶液制备 根据标称，用水调节待测液体样品的核糖核酸酶活力在10U/mL～200U/mL。 7.3酶促反应 同一样本取4只离心管，设置空白对照管1只，检测管3只，其中空白管中依次加人酵母RNA溶 液1.5mL、水0.5mL与NaAc/HAc缓冲液1.0mL；检测管中依次加人酵母核糖核酸（RNA）溶液 管，50℃士1℃恒温水浴反应时间为15min。 7.4分光光度分析 空白对照管标记为0号管，检测管分别标记为1号管～3号管，加样方法如表1所示，反应后在 260nm处测对照管和检测管溶液的吸光度，并记录结果 表1 待测样液加样方法 试剂 0号管 1号管 2号管 3号管 酵母核糖核酸溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 水/mL 0.5 0.0 0.0 0.0 NaAc/HAc缓冲液/mL 1.0 1.0 1.0 1.0 待测酶液/mL 0.0 0.5 0.5 0.5 2