ICS 65.080 CCS B 10 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3833—2021 微生物肥料菌种保藏技术规范 Technical specification of culture preservation for microbial fertilizers 行业标准信息服务平台 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3833—2021 公共服务平台 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、中国农业微生物菌种保藏管理中心。 本文件主要起草人：李世贵、顾金刚、马晓彤、邓晖、张晓霞。 行业标准信息服务平台 NY/T 3833—2021 微生物肥料菌种保藏技术规范 1范围 本文件规定了微生物肥料菌种保藏的术语和定义、基本原则、技术要求和技术方法。 本文件适用于微生物肥料生产和研究的菌种保藏。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中，注日期的引用文件，仅 NY/T11132006 微生物肥料术读D NY/T18472010 微生物肥料生产菌株质量评价 3术语和定义 1847 件 NY/T1113 2006 2010界定的以 S 3. 1 微生物肥料 microbial fertilizer 含有特定微生物活体的 肥料制品器 应用宇衣业生产 通过其中所合微生 物 加植物养分 供应或促进植物生 提高 量，改善衣产品品质及衣业生态环境。 注：日前，微生物肥料包含 改生物接种剂、复合微生物肥料和生物有机肥 ［来源：NY 2010.3. 3. 2 菌种保藏 使菌种保持 力同有的遗传和牛理生化特性以及形 态特征的微 [来源：NY/T 3.3 定期移植法 将菌种接种于适宜的培养基，有 适条件 幸稳定期万车 保存，并间隔一定时 间进行移植培养。 注：亦称传代培养保藏法，包插斜而培养、穿刺 和液体瑞养 3. 4 液体石蜡保藏法liquidparaffinpreservationmethod 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，在最适条件下培养 全菌种长出健壮菌苔后，注人灭菌的液体石蜡 覆盖整个斜面，再直立放置于4℃～6℃低温或室温干燥环境进行保存。 3.5 沙土管保藏法 sand-soil pipe preservation method 刮下混于灭菌的沙土管中，使其吸附在沙土载体上，将管中水分抽干后，熔封管口或石蜡密封管口后置干 燥器中，置于4℃~6℃低温或室温保存。 3.6 冷冻干燥保藏法freeze-dryingpreservationmethod 将欲保藏的菌种加人保护剂制成菌悬液后，分装于安颜管中冻结，然后在减压条件下利用升华现象除 1 NY/T3833—2021 去水分，达到真空干燥后，熔封管口，放置于4℃6℃低温保存。 3.7 低温冻结保藏法cryopreservationmethod 将欲保藏的菌种加人保护剂后，放置于一20℃或一80℃低温冰箱中保存。 3.8 液氮超低温保藏法liquidnitrogencryopreservationmethod 将欲保藏的菌种加入保护剂后，放置于一196℃的液态氮中或一150℃的氮气中保存。 4基本原则 4.1使用的微生物肥料菌种应安全、有效，生产者应提供菌种的分类鉴定报告，包括属及种的学名、形态、 生理生化特性及鉴定依据等完整资料，以及菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应获准允许大面积释 放的生物安全性有关批文。 4.2针对特定的微生物肥料菌种应选择适宜的保藏方法，保持菌种的原有性状，避免菌种死亡、退化、变 异或污染。 4.3菌种保藏环境应相对独立和洁净，避免菌种间的交叉污染。 4.4菌种保藏应符合环境保护要求，不应对周围环境造成污染和危害。 4.5菌种宜采用2种以上的保藏方法进行保存。不同类别微生物肥料菌种适宜采用的菌种保藏方法及 保藏时间见表1。 表1 不同类别微生物肥料菌种适宜采用的菌种保藏方法及保藏时间 序号 保藏方法 保藏时间 适用菌种类别 定期移植法 3个月～6个月 细菌、放线菌、酵母菌、真菌等各类微生物肥料菌种 2 液体石蜡保藏法 2年～3年 不能分解液体石蜡的细菌、放线菌、酵母菌和丝状真菌等微生物肥料菌种 3 沙土管保藏法 2年～10年 芽孢杆菌、产孢放线菌以及产孢真菌等微生物肥料菌种 4 冷冻干燥保藏法 5年～20年 大多数细菌、放线菌、酵母菌和部分丝状真菌等微生物肥料菌种 低温冻结保藏法 5 2年～5年 细菌、放线菌、酵母菌、真菌等各类微生物肥料菌种 6 液氮超低温保藏法 20年以上 细菌、放线菌、酵母菌、真菌等各类微生物肥料菌种 5技术要求 5.1菌种保藏需选择合适的培养基，可参考《中国菌种目录》和NY/T1114及NY/T2321。 5.2菌种保藏过程中应注意无菌操作，避免污染。 5.3菌种保藏时应做好标记，标明菌种编号、菌种名称和保藏日期等信息。 息服务平台 5.4菌种培养至稳定期或产生成熟孢子后进行保藏。 6技术方法 6.1定期移植法 6.1.1适用范围 本方法适用于细菌、放线菌、酵母菌、真菌等各类微生物肥料菌种的短期保藏。 6.1.2原理 低温可减缓菌种的代谢活动，抑制其生长繁殖速度，减少菌株变异、延长菌种保藏的时间。通过定期 移植，保持菌种活力，避免菌种大量死亡等。 6.1.3操作步骤 按照附录A的规定执行。 2