ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3862—2021 茶云纹叶枯病监测技术规程 Technical code of practice for monitoring tea brown blight disease 行业标准信息服务平台 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3862—2021 全国农前食品标准 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：华中农业大学、武汉海关技术中心。 本文件主要起草人：徐文兴、倪德江、王振华、王琴、宋育林、余志、郭飞。 行业标准信息服务平台 NY/T 3862—2021 茶云纹叶枯病监测技术规程 1范围 本文件规定了茶云纹叶枯病的监测时期、监测点和监测方法。 本文件适用于全国各茶区茶云纹叶枯病的监测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过 中的现范性引用而构成本 件必 不可少的 款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用 活所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T5018 3术语和定义 下列术语利 3. 1 tel 茶云纹叶枯病 茶叶枯痛 由山茶刺 起的 病 害，主要危害叶 Cate 落也 技务和果实，导致新梢枯死和树势衰退 片，可导致叶 病的分布与危 环循环 害、症状、病 CENTE 3. 2 监测 monit 对茶云纹叶 3. 3 R 实时荧光定量 timc quantitati ive polymerase chain reaction PC 在PCR反应体 加人费 宝品和男实 利 进程，最后通过Ct值 (cyclethreshold）和标 刮病 健和定量 斤的方法。 3. 4 五点式取样法fivespot sampling metho 举点，再在对角线上选择 先确定对角线的中点作为中心 中点样点距离相等的点作为样点的 取样方法。 3. 5 发病率disease incidence 3. 6 病情指数diseaseindex(DI) 根据一定数目的植株或植株器官各病级数量计算平均发病程度的数值。 4鉴定方法 4.1样品采集 对随机选取叶片先进行目测，对出现黄绿色至深浅褐色、灰白色相间不规则形病斑叶片进行现场鉴 1 NY/T3862—2021 定，并采集叶片进行室内鉴定。危害症状见附录A。 4.2实验室鉴定 4.2.1形态特征鉴定 将可疑的病变组织，剪成0.4cmX0.4cm小片，在1.0%（V/V）次氯酸钠溶液中消毒5min，灭菌水 冲洗3次，灭菌滤纸吸干水分后，置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，每皿放置3片～4片，25℃培养， 3d后开始观察。解剖镜下发现有菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转人马铃薯葡萄糖琼脂培养基上纯 化培养。7d后用显微镜观察，记录其形态特征，参照附录A描述的病原菌形态特征进行鉴定。 4.2.2实时荧光定量PCR法鉴定 从现场采回的样品采用实时荧光定量PCR法进行分子鉴定，实验步骤按附录B的规定执行。 4.3结果判断 4.3.1病原形态特征鉴定 当从采集的样品叶片中分离获得的病原菌培养性状或形态特征应符合附录A描述特征，即可判定为 样本中含茶云纹叶枯病菌。 4.3.2实时荧光定量PCR法鉴定 样品采用实时荧光定量PCR法进行分子鉴定，如果空白对照和阴性对照没有扩增，同时阳性对照有 有效扩增，表示测定结果可靠，并根据阳性对照和阴性对照的Ct值判断茶叶是否有茶云纹叶枯病菌。 5监测方法 5.1监测植物 对茶云纹叶枯病感病和抗性较差的茶树品种和品系。 5.2监测时期 每年的5月10月。 5.3监测内容 5.3.1病情调查法 每个县（地区）选取代表性的3个～5个茶园作为观测点，每个点要求2.0亩以上茶园面积。采用5 点式取样法每点随机选取50个叶片，每隔10d调查一次。将调查结果填人表C(见附录C)。 5.3.2分级标准 茶云纹叶枯病的分级标准如下。 0级：无病； 1级：病斑面积占整片叶面积的10%以下； 2级：病斑面积占整片叶面积的10%～25%， 3级：病斑面积占整片叶面积的25%~50%： 4级：病斑面积占整片叶面积的50%以上。 5.3.3发病率和病情指数 按照分级标准对小区的发病情况进行调查和记录，计算发病率和病情指数（DI）。 发病率计算方法为：发病率一发病叶数/调查总叶数×100% 病情指数计算方法为： DI=Z（各级级值X该级病叶数）/（调查总数X最高级值）X100 6调查记录 记录鉴定和调查的方法，过程和结果，并存档（见附录D、附录E）。 2