ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3867—2021 粮油作物产品中黄曲霉毒素B1、环匹 阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素的快速 检测 胶体金法 Rapid detection of aflatoxin Bi,cyclopiazonic acid, and sterigmatocystin in products of cereals and oil crops by colloid gold method 行业标准信息服务平台 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3867—2021 全国农业食富标准 则/的规定 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部生物毒素检测重点实验室、农业农村 部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）、国家农业检测基准实验室（生物毒素）。 本文件主要起草人：张奇、唐晓倩、李慧、王督、李培武 服务平台 NY/T3867—2021 粮油作物产品中黄曲霉毒素B1、环匹阿尼酸毒素、 杂色曲霉毒素的快速检测胶体金法 1范围 本文件规定了粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素和杂色曲霉毒素快速检测的胶体 金法。 本文件适用于花生、大米、玉米、小麦、大豆五种粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂 色曲霉毒素的快速筛查。其他粮油作物产品可参考。 本方法检出限：黄曲霉毒素B1.0uμg/kg，环匹阿尼酸毒素50.0μg/kg，杂色曲霉毒素200.0ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素与胶体金标记的特异性单克隆抗体发生结合 后，抑制了流动过程中抗体与硝酸纤维素膜检测线上黄曲霉毒素B-BSA偶联物、环匹阿尼酸毒素-BSA 偶联物、杂色曲霉毒素BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色变浅，通过检测颜色变化进行测定试样中毒 素的含量水平。 5试剂 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 5.1水，符合GB/T6682中规定的二级用水。 5.2 乙晴(CH,CN)。 5.3燕糖（C2H22On）。 5.4牛血清白蛋白（BSA），纯度大于98%。 5.5吐温20（Cs8HmO26）。 5.6氯化钠(NaCI)。 5.7黄曲霉毒素B,（CAS号：1162-65-8），纯度大于98%。 5.8环匹阿尼酸毒素（CAS号：18172-33-3），纯度大于98%。 5.9杂色曲霉毒素（CAS号：163391-76-2），纯度大于98%。 5.1070%乙晴溶液：取70mL乙睛（5.2）和30mL水（5.1），混匀。 5.11试样稀释液：称取1.0g蔗糖（5.3）、0.5g牛血清白蛋白（5.4）和2.5g吐温-20（5.5），用水（5.1)溶 解定容至100.0ml.现用现配。 5.12黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素标准样品储备溶液：分别称取标准品黄曲霉毒素B （5.7）、环匹阿尼酸毒素（5.8）、杂色曲霉毒素（5.9）各1.0mg（精确至0.01mg），用乙（5.2）溶解定容至 NY/T3867—2021 10.0mL。此标准溶液浓度为0.10mg/mL，一20℃保存，备用。 5.13胶体金标记抗体复合物：黄曲霉毒素B1、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素单克隆抗体的纯度不低于 80%亲和力常数不低于1.00×10°L/mol、与其他毒素交叉反应率小于10%。 6仪器设备 6.1胶体金多通道检测仪，信号值变异系数CV<3.0%。 6.2免疫层析检测试纸条：固定有黄曲霉毒素B-BSA偶联物、环匹阿尼酸毒素-BSA偶联物、杂色曲霉 毒素-BSA偶联物，用于样品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素与胶体金标记抗体预反应 后再与偶联物反应的载体。 6.3均质机。 6.4分析天平：感量0.01mg .1mg利o. 6.5恒温装置：（37.0± 6.6涡旋混合器： 000. 6.7微量移液器 6.8有机相滤膜 TA 6. 9 中速定性 S 7分析步骤 7.1样品提取、 白基质溶液制 7.1.1样品提取 09mm筛孔的试样于烧杯牛 m4. 准确称取 伴过 氯化钠及加入 （510) 100mL乙睛 2min后，静置mm.中速定性滤 纸（6 滤。取1.0mL 均质机（6：3）取 6.8)过 备用。 滤液，加人3 混勾经有机相油 C 7.1.2空白基质溶液制备 M 取空白样 品 1制各空白基质潜液备用 7.2取50L胶 胶体金标记环匹阿尼酸毒素 金际记 杂色曲霉毒素混合溶 液于1.5mL样 7.3取7.1.1制备 垂直滴加子样品瓶内C 羊品瓶置于恒温装置 （6.5）中反应3min， 天折检测试纸条（6.2）接使用要求） 向插人到加样后的样品瓶 中，于恒温装置（6.5）中反应6mim， 取代A素免瘦厚析检测试纸条，上机（6 检测。 7.4标准曲线 将黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素标准溶液（5.12）用空白基质溶液（7.1.2）配制为系 列梯度标准工作液，按由低到高的浓度次序进不 检测（每个样品重复3次），根据检测线T 信号值与质控线C信号值的比值（T/C）和标准宿 度的自然对数值（lnc）建立标准曲线（r≥0.95） 8结果计算 8.1结果测定 试样中黄曲毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素含量以质量分数X计，数值以微克每于克 (μg/kg）表示，按公式(1)计算。 X=exVXn （1） m 式中： 试样中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素含量的数值，单位为微克每千克（μg/kg）； 2