ICS 71.040.40 CCS X 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3870—2021 硒蛋白中硒代氨基酸的测定 液相色谱原子荧光光谱法 Determination of selenoamino acid in selenoprotein- Liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 行业标准信息服务平台 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3870—2021 言 全国农业品标准 徐共服务平台 本文件按照GB/T1.1- 2020《标准化工作导则 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：恩施土家族苗族自治州农业科学院、武汉大学、中硒健康产业投资集团股份有限 公司。 本文件主要起草人：陈永波、刘淑琴、李卫东、黄光昱、张朝阳、胡中立、陈娥、胡百顺、秦邦、刁英、熊倩、 朱云芬、瞿勇、田宗仁、靳素荣。 行业标准信息服务平台 NY/T3870—2021 硒蛋白中硒代氨基酸的测定 液相色谱原子荧光光谱法 1范围 本文件规定了液相色谱原子荧光光谱法测定硒蛋白中水解硒代氨基酸的方法。 本文件适用于硒蛋白水解后硒代氨基酸[硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基-硒代半胱氨酸（MeSeCys）和硒 代甲硫氨酸（SeMet）含量之和的测定。 本文件适用于植物源硒蛋白和微生物源酒蛋自中酒代氨基酸的测定。 本方法的检出限分别为SeCys 0.070mg/kg.MeSeCys0.032mg/kg.SeMet0.14mg/kg. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过义 其中，注日期的引用文件， 仅注该日期对应的版 本适用 任期的 舌所有的修改单）适用于本 文件。 GB 1903. 28 20 硒蛋 用水规格和武验方法 GB/T 6682 3术语和定义 义返用 下列术语 和定 本文件 R 3. 1 硒蛋白 selenoprotein 以含硒量铰高 的可食植物、微生物为原料 请制而成的富含硒 代氨基酸的食 养强化剂 ［来源：GB1903.28 3.2 硒代氨基酸 硒蛋白水解后分靠成的 SeCysMeSecys和SeMu 4 原理 硒蛋白经盐酸水解后分解成Se 色谱柱分离后由原子荧 光光谱仪测定。峰面积与浴液中被检测成 呈正以保留时间定性 标法定量。 5试剂或材料 5.1试剂 5.1.1盐酸(HCI)：优级纯。 5.1.2 甲酸(HCOOH)。 5.1.3 氢氧化铆（KOH)。 5. 1. 4 氢氧化钠（NaOH)。 5. 1.5 5碘化钾（KI)。 5. 1. 6 硼氢化钾（KBH）。 5. 1.7 磷酸氢二铵[（NH）HPO,。 NY/T3870—2021 5.2溶液配制 5.2.1盐酸溶液（6mol/L）：量取500mL盐酸（5.1.1)，用水定容至1000mL。 5.2.2磷酸氢二铵溶液（40mmol/L，pH=6.0)：称取5.282g磷酸氢二铵（5.1.7)溶于水中，加水至约 950mL用甲酸（5.1.2）调节pH=6.0，用水定容至1000mL,0.45μm滤膜（水相）过滤，超声脱气 2 min~3 min。 5.2.32%碘化铆十0.5%氢氧化钾溶液：称取20.0g碘化钾（5.1.5）、5.0g氢氧化钾（5.1.3)，用水定容 至1000mL。 5.2.41.5%硼氢化钾+0.5%氢氧化钾溶液：称取15.0g硼氢化钾（5.1.6)、5.0g氢氧化钾（5.1.3)，用 水定容至1000mL。 5.2.5盐酸溶液（10%）：量取100mL盐酸（5.1.1），用水定容至1000mL。 5.2.6氢氧化钠溶液（6mol/L）：称取氢氧化钠（5.1.4)24g，用水定容至100ml。 5.2.7氢氧化钠溶液（1mol/L)：称取氢氧化钠（5.1.4)4g，用水定容至100mL。 5.3标准品 5.3.1硒代胱氨酸标准溶液（GBW10087）。 5.3.2甲基硒代半胱氨酸标准溶液（GBW10088）。 5.3.3硒代甲硫氨酸标准溶液（GBW10034）。 5.4标准溶液配制 5.4.1硒代胱氨酸标准储备溶液：将硒代胱氨酸标准溶液（5.3.1)2mL转人10mL容量瓶中，用水定容 至10mL 5.4.2甲基-硒代半胱氨酸标准储备溶液：将甲基-硒代半胱氨酸标准溶液（5.3.2)2ml转入10mL容量 瓶中，用水定容至10mlL。 5.4.3硒代甲硫氨酸标准储备溶液：将硒代甲硫氨酸标准溶液（5.3.3)2mL转人10mL容量瓶中，用水 定容至10mL。 注：此标准储备溶液在4℃冰箱中保存，有效期为1个月。 5.4.4吸取5.4.1~5.4.3的标准储备液各1.00mL于10mL容量瓶中，用水定容，配置成混合标准工 作液。 6仪器设备 6.1高效液相-原子荧光联用仪（带阴离子交换柱和硒空心阴极灯）。 6.2微波蛋白水解仪。 6.4电位滴定仪或pH计。 6.5溶剂过滤装置。 注：实验中所用玻璃器Ⅲ、石英杯均需以硝酸溶液(V硝酸：V水=1：4)浸泡过夜，用水冲洗干净。 7试验步骤 7.1试样保存 待检、已检硒蛋白样品需装在锡箔或铝箔包装袋中，放人4℃冰箱中保存。 7.2试样制备 称取试样20mg（精确到0.1mg）于微波蛋白水解仪（6.2)配套的内插杯内，加人1mL6mol/L盐酸 溶液（5.2.6）和1mol/L氢氧化钠溶液（5.2.7）调节pH至7.5，转移到25mL容量瓶中，加水定容后用 0.45um滤膜过滤，待测。同时做空白实验。 2