ICS 65.120 CCS B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3879—2021 饲料中25一羟基维生素D3的测定 Determination of 25-Hydroxy Vitamin D,in feeds 行业标准信息服务平台 2021-11-01实施 2021-05-07发布 中华人民共和国农业农村部 5发布 NY/T3879—2021 言 全国农业翰品标准 本文件按照GB/T1.12020《标准化上作导则 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。 本文件起草单位：上海市兽药饲料检测所、帝斯曼维生素（上海）有限公司。 本文件主要起草人：黄士新、商军、曹莹、张浩然、王博、严凤、华贤辉、张亦菲、田恺、黄家莺、吴剑平、徐 汀、张婧、贡松松、张进、王晓燕、虞哲高、肖平、石宝石。 行业标准信息服务平台 NY/T3879—2021 饲料中25-羟基维生素D3的测定 1范围 本文件规定了饲料中25-羟基维生素D，测定的高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。 本文件中高效液相色谱法适用于含量大于2mg/kg的添加剂预混合饲料中25-羟基维生素D.含量的 测定；液相色谱-串联质谱法适用于配合饲料、浓缩饲料和含量小于等于2mg/kg的添加剂预混合饲料中 25-羟基维生素D:含量的测定。 本文件高效液相色谱法中添加剂预混合饲料的检出限为0.2mg/kg.定量限为1.0mg/kg。液相色 为10μg/kg：添加剂预混 2规范性引用文件 通过 下列文件中的 规范 引用而构成本文件必 少 日期的引用文件， 期的 用文件具最新版本 修改单）适用于本 文件。 S GB/T668 析实验 用水规格和试验方法 GB/T20195 动物 试样的制省 A 3术语和定义 R 要界是的 本文件没有 CE 4高效液相色谱 4.1原理 外标 试样依次加水 基维牛素 用高效液相色谱仪测 大定量。 R 4.2试剂或材料 4.2.1水:GB/T 级 4.2.2甲醇：色谱纯 4.2.385%甲醇溶液： mL中醇心 加水稀释全 4.2.4标准储备溶液（1mg /mL）：称取23实维生素D标准品（C2H H,O.CAS号：63283-36-3. 纯度不低于98%）25mg，准确至0.01mg，置争25ml棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.2）溶解定容。于 20℃下保存，有效期为2个月。 维生素D标准储备溶液（4.2.4）2.00mL于 20mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.2)定容。于4℃冷藏保存，有效期为2周。 中，用甲醇（4.2.2)定容。临用现配。 4.2.7标准系列溶液：分别准确移取标准中间溶液Ⅱl（4.2.6）适量于棕色容量瓶中用85%甲醇溶 液（4.2.3）稀释定容配成标准系列溶液，浓度分别为0.05μg/ml、0.5μg/mL、1μg/mL、5ug/ml、 10μg/mL、25μg/mL。临用现配。 4.2.8微孔滤膜：0.22μm，有机系。 4.3仪器设备 4.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器/二极管阵列检测器。 1 NY/T3879—2021 4.3.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg 4.3.3离心机：转速不低于9000r/min。 4.3.4超声波仪：功率不低于280W。 4.4样品 按GB/T20195的规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混勺， 装人磨口瓶中，避光保存，备用。 4.5试验步骤 4.5.1试样溶液的制备 平行做2份试验。称取试样3g，准确至0.0001g，置于50mL离心管中，加水10mL，超声10min， 期间旋摇1次以防样品附着管底，加入甲醇（4.2.2）30mL，摇匀，超声提取20min，以6000r/min的转速 离心5min，将上清液转移至50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2.2）定容至刻度，摇匀；过0.22μm滤膜，待 上机。 4.5.2液相色谱参考条件 色谱柱：ThermoAQUASILDCl柱，长150mm，内径3mm，粒径3μm，或性能相当者。 柱温：30℃。 检测波长：264nm。 流动相：A相为水，B相为甲醇（4.2.2），梯度洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱程序 时间，min A相.% B相,% 0.00 15 58 10.00 0 100 15.00 0 100 16.00 15 85 20.00 15 85 流速：0.6mL/min。 进样量：50。 4.5.3测定 4.5.3.1标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下，分别取标准系列溶液（4.2.7)和试样溶液（4.5.1）上机测定。25-羟基维生素 D标准溶液的液相色谱图见附录A。 4.5.3.2定性 以保留时间定性，试样溶液中25-羟基维生素D，保留时间应与浓度相当的标准系列溶液的25-羟基维 生素D的保留时间一致，其相对偏差在土2.5%之内。 4.5.3.3定量 以25-羟基维生素D的浓度为横坐标、色谱峰面积（响应值）为纵坐标，绘制标准曲线，其相关系数应 样溶液用85%甲醇溶液（4.2.3）稀释（n倍）后，重新测定。单点校准定量时，试样溶液中25-羟基维生素 D的浓度与标准溶液浓度相差不超过30%。 4.6试验数据处理 试样中25-羟基维生素D（C27HO2·H2O)含量以质量分数计。多点校准按公式(1)计算，单点校准 按公式（2）计算。 1）ThermoAQUASIL是由美国赛默飞世尔科技（Thermo）公司提供的色谱柱商品。给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并 不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2