ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3903—2021 枸杞中黄酮类化合物的测定 Determination of flavonoids in Lycium barbarum L. 行业标准信息服务平台 2021-11-01实施 2021-05-07发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3903—2021 公共服务平台 典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 起草。 本文件由农业农村部乡村产业发展司提出并归口。 心）、中国农业科学院农产品加工研究所。 本文件主要起草人：王晓菁、吴燕、张锋锋、牛艳、李庆鹏、王彩艳、杨静、赵子丹、刘霞、陈翔、开建荣、李 彩虹、石欣、王晓静。 行业标准信息服务平台 1 NY/T 3903—2021 枸杞中黄酮类化合物的测定 1范围 本文件规定了枸杞中总黄酮含量的分光光度计测定方法和枸杞中3种黄酮类化合物（见附录A）含量 的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于枸杞（包含干果、鲜果）中总黄酮及黄酮类化合物含量的测定。 2规范性引用文件 件，仅该日期对应的版本适用于 版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 试验方 GB/T 6682 3术语和定义 本文件没有需要 长语和定义 JRAL 分光光度法测定枸杞中总黄酮的含量 4原理 酮 枸杞中的总 醇溶液提取后，在弱碱性条件下铝盐 人氢氧化钠溶 总 黄酮含量呈正 液后显色，在波 创比较整 CEI 比，通过与标准系 5试剂与材料 除非另有说明 众析 ER 5.1试剂 5.1.1无水乙醇（C 5.1.2亚硝酸钠（NaN CAS 5.1.3硝酸铝LAI(NO3) H,O,C 5.1.4氢氧化钠(NaOH,CA. 1310-73-2 5.2溶液配制 5.2.2乙醇溶液（3+7)：取30mL无水乙醇加人70mL水中，搅拌均匀、备用。 5.2.3亚硝酸钠溶液（50g/L）：准确称取5.00g亚硝酸钠于烧杯中，加适量水溶解.转人100mL容量瓶 中，用水定容至刻度，摇匀、备用。 5.2.4硝酸铝溶液（100g/L)：准确称取17.60g硝酸铝于烧杯中，加适量水溶解，转人100mL容量瓶 中，用水定容至刻度，摇匀、备用。 5.2.5氢氧化钠溶液（40g/L）：准确称取20.00g氢氧化钠于烧杯中，加适量水溶解，转人500mL容量 瓶中，用水定容至刻度，摇匀、备用。 5.3标准品 芦丁标准品（CzH3O1CAS号：153-18-4）：纯度≥98%。 1 NY/T 3903—2021 5.4标准溶液配制 芦丁标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取芦丁标准品0.05g（精确至0.0001g），用乙醇溶液 (5.2.1)溶解并定容至50.0mL棕色容量瓶，摇匀，配制成1.00mg/mL标准储备液。 6仪器与设备 6.1可见分光光度计。 6.2分析天平：感量0.0001g及0.01g。 6.3水浴振荡器：振荡频率不低于240r/min。 6.4离心机：转速不低于4000r/min。 6.5涡旋混合器。 6.6高速粉碎机：转速不低于10000r/min。 6.7破壁机：转速不低于10000r/min。 6.8比色皿L：玻璃。 7分析步骤 7.1试样制备 7.1.1枸杞干果 碎至枸杞中籽粒成粉末状，置于样品瓶中于一18℃冷冻保存，备用。 7.1.2枸杞鲜果 去除枸杞中果柄等杂质，用破壁机匀浆，测定。 7.2试样提取 7.2.1枸杞干果 称取粉碎试样1g（精确至0.0001g）于50mL离心管中，加人20mL乙醇溶液（5.2.1）涡旋混匀 1min在60℃水浴200r/min振荡频率下振荡提取30min后，于4000r/min离心5min，上清液转入 50.0mL容量瓶中，残渣用20mL乙醇溶液（5.2.1)重复提取一次，合并上清液，冷却至室温后，定容至刻 度。准确吸取上清液1.00mL于10mL离心管，加人4.00ml无水乙醇，摇匀，静置5min，于4000r/min 离心5min，将上清液转人10mL比色管中，待测。 7.2.2枸杞鲜果 称取浆状试样10g（精确至0.01g）于50ml离心管中，其他提取步骤同7.2.1。 7.3标准曲线的绘制 分别吸取芦丁标准储备液（l.00mg/mL)0mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL0.30mL、0.40mL、 0.50mL、0.60ml于10.0mL比色管中，加人4.00mL无水乙醇，摇匀，然后加人亚硝酸钠溶液（5.2.3） 0.5mL，摇匀；静置5min，加人硝酸铝溶液（5.2.4)0.5mL，摇勺匀；静置5min，加人氢氧化钠溶液（5.2.5） 2.0mL，摇匀。最后用乙醇溶液（5.2.2）定容，得到浓度为0mg/L5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L 30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L、60.0mg/L的标准系列工作液，在波长508nm处测定吸光度。以芦 丁质量浓度p（mg/L)为横坐标、相应的吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程。 7.4测定 将7.2.1、7.2.2待测液中加入亚硝酸钠溶液（5.2.3)0.5mL，摇匀；静置5min，加人硝酸铝溶液 （5.2.4)0.5mL，摇勾；静置5min，加人氢氧化钠溶液（5.2.5)2.0mL，摇勺。最后用乙醇溶液（5.2.2)定 容至10.00mL，摇匀。试样于波长508nm处测定，以测得吸光值由标准曲线查得试样待测液中芦丁的 含量。同时做空白试验。 7.5空白试验 2